小鼠趨化因子CXCL12 elisa檢測(cè)試劑盒

日期：2023-05-26 11:05:28

小鼠趨化因子CXCL12在多個(gè)生理和病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。ELISA（Enzyme-linked immunosorbent assay）是目前常用的測(cè)定小鼠CXCL12含量的方法之一。本文將介紹小鼠CXCL12 ELISA檢測(cè)試劑盒的操作步驟及相關(guān)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)。

elisa試劑盒

1、實(shí)驗(yàn)材料：

(1) 小鼠CXCL12 ELISA檢測(cè)試劑盒（如武漢華美生物公司提供的）

(2) 小鼠血清或其他組織液體樣品

(3) 標(biāo)準(zhǔn)品（小鼠CXCL12蛋白標(biāo)準(zhǔn)，如cusabio公司提供的）

(4) PBS緩沖液

(5) HRP發(fā)光底物

(6) 阻斷溶液

(7) ELISA微孔板、洗滌緩沖液

(8) 離心管、移液器等通用實(shí)驗(yàn)室工具

小鼠cxcl12 elisa試劑盒

2、實(shí)驗(yàn)步驟：

(1) 標(biāo)準(zhǔn)品制備

將標(biāo)準(zhǔn)品按照說(shuō)明書中的濃度序列稀釋至不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線系列，例如：0pg/mL、15.6pg/mL、31.3pg/mL、62.5pg/mL、125pg/mL、250pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL。將各個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品分別加入微孔板中，不同濃度樣品均加入三個(gè)重復(fù)孔位，最后一個(gè)空孔位作為陰性對(duì)照。

(2) 樣品處理

將收集好的小鼠血清或其他組織液體樣品按照說(shuō)明書要求預(yù)處理，如需去除紅細(xì)胞、脂類等可以離心處理，再進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屩梁线m的濃度。每個(gè)樣品加入三個(gè)重復(fù)孔位。

(3) 添加試劑

將阻斷溶液加入微孔板中，室溫靜置30分鐘，然后倒掉溶液，用PBS緩沖液進(jìn)行洗滌，使微孔板反復(fù)洗滌3次。將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品加入微孔板中，室溫下靜置2小時(shí)或過(guò)夜。每個(gè)孔位添加樣品或標(biāo)準(zhǔn)品100μL。

(4) 洗滌步驟

在每一步操作結(jié)束后，使用洗滌緩沖液洗滌微孔板，使微孔板反復(fù)洗滌3次，每次洗滌時(shí)間為30秒。

(5) 加入HRP發(fā)光底物

將HRP發(fā)光底物加入每個(gè)孔位中，室溫下靜置30-60分鐘，避免陽(yáng)性信號(hào)過(guò)強(qiáng)。每個(gè)孔位添加100μL。

(6) 讀板

使用ELISA檢測(cè)試劑盒所配套的酶標(biāo)儀測(cè)量各個(gè)孔位的吸光度值，記錄并分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

(1) 操作前將試劑室和實(shí)驗(yàn)臺(tái)消毒，保持干凈整潔；