人血清e(cuò)lisa實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟
日期：2023-08-07 15:21:57
人血清ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）是一種常用于檢測(cè)特定抗原或抗體在人血清中的方法。以下是人血清ELISA實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟：
前處理：將人血清樣本離心，分離血清并轉(zhuǎn)移到新的離心管中?？梢允褂媚z管或離心機(jī)進(jìn)行離心。
包被抗原：將待測(cè)抗原溶液添加到微孔板的孔中，并在恒溫條件下孵育一段時(shí)間，使抗原吸附到孔內(nèi)壁。
阻斷：用一種阻斷劑（例如牛血清蛋白、BSA等）封閉剩余的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，防止樣品中的非特異性蛋白質(zhì)與孔壁結(jié)合。
加入標(biāo)準(zhǔn)品與待測(cè)樣本：將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本加入到已包被的孔中，使其與孔內(nèi)的抗原發(fā)生特異性結(jié)合。
洗滌：通過(guò)多次洗滌，去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)，減少干擾物的存在。
添加檢測(cè)抗體：加入與待測(cè)抗原或抗體特異結(jié)合的酶標(biāo)記二抗（如HRP標(biāo)記的抗人IgG），并孵育一定時(shí)間，使其與結(jié)合在孔中的抗原或抗體結(jié)合。
再次洗滌：洗滌去除未結(jié)合的檢測(cè)抗體。
加入底物：加入適當(dāng)?shù)牡孜铮ㄈ鏣MB）反應(yīng)，并在暗處孵育一段時(shí)間，使其與酶發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生可量化的信號(hào)。
停止反應(yīng)：通過(guò)添加停止液（如硫酸或鹽酸）停止底物的反應(yīng)，阻止進(jìn)一步顏色的發(fā)展。
讀取結(jié)果：使用ELISA閱讀器檢測(cè)各孔的吸光度（OD值），并據(jù)此計(jì)算待測(cè)樣本中抗原或抗體的濃度。
每個(gè)實(shí)驗(yàn)室可能會(huì)有一些細(xì)微的差別和優(yōu)化步驟，具體操作可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體要求和試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行調(diào)整。
