蛋白質(zhì)控

華美生物所有蛋白產(chǎn)品都會(huì)經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制，包括蛋白質(zhì)的濃度測(cè)定、純度測(cè)定、分子量檢測(cè)、內(nèi)毒素檢測(cè)、蛋白質(zhì)活性檢等。蛋白質(zhì)質(zhì)量控制的流程圖如下：

1. 蛋白濃度測(cè)定

蛋白質(zhì)濃度檢測(cè)的方法有bradford法、BCA法、A280法，根據(jù)緩沖成本選擇合的檢測(cè)方法，其中最常用的為bradford法，濃度檢測(cè)的范圍為1-5mg/ml。Bradford法標(biāo)準(zhǔn)曲線如下圖所示：

2. 蛋白分子量檢測(cè)

蛋白質(zhì)分子量檢測(cè)采用考馬斯亮藍(lán)顯色結(jié)合SDS-PAGE檢測(cè)，分子質(zhì)量跟氨基酸序列推測(cè)的理論分子質(zhì)量一致。重組小鼠 Calreticulin(Calr)蛋白理論分子質(zhì)量為73.3KD，其檢測(cè)結(jié)果如下：

3. 蛋白質(zhì)純度檢測(cè)

蛋白質(zhì)純度檢測(cè)采用考馬斯亮藍(lán)顯色SDS-PAGE分離蛋白，通過bandscan軟件分析蛋白質(zhì)的純度，蛋白質(zhì)的純度需達(dá)到90%。

4. 蛋白內(nèi)毒素檢測(cè)

內(nèi)毒素檢測(cè)采用 LAL方法，內(nèi)毒素含量低于1 EU / μg。

5. 蛋白質(zhì)活性檢測(cè)

蛋白質(zhì)活性檢測(cè)有ELISA方法，細(xì)胞活性檢測(cè)，酶活性檢測(cè)方法三種方法，其中受體蛋白主要采用ELISA方法，細(xì)胞因子類蛋白采用細(xì)胞活性檢測(cè)法，酶類采用活性檢測(cè)方法。

Measured by its binding ability in a functional ELISA. Immobilized ACKR1 at 1 μg/ml can bind human CCL2, the EC50 of human CCL2 protein is 48.64-60.24 μg/ml.

Measured in a cytotoxicity assay using L 929 mouse fibroblast cells in the presence of the metabolic inhibitor actinomycin D. The ED50 for this effect is 33.32-47.38 pg/ml

6. 測(cè)序

蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的核心技術(shù)之一，是鑒定蛋白質(zhì)的主要方法。質(zhì)譜分析可分為兩類：MALDI-TOF和LC-MS / MS，其中，LC-MS / MS具有更高的靈敏度和幾乎100％的可靠性，這是文獻(xiàn)中最常用的方法。目前，從蛋白質(zhì)樣品混合物中鑒定單一蛋白是蛋白質(zhì)研究中的一個(gè)核心問題。分離蛋白質(zhì)混合物有兩種常用方法：二維凝膠電泳（2-DE）和聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE，十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳）。

現(xiàn)今，華美生物的蛋白質(zhì)凝膠條和凝膠點(diǎn)鑒定已經(jīng)形成了一套成熟的流程，主要包括通過一維或二維電泳獲得目標(biāo)蛋白條帶和斑點(diǎn)，并連續(xù)優(yōu)化凝膠內(nèi)酶解方法，然后通過LC-MS / MS分析獲得蛋白質(zhì)碎裂芯片電荷，峰圖和其他相關(guān)信息。該方法可以顯著提高質(zhì)譜鑒定的成功率和蛋白質(zhì)凝膠消化中肽的覆蓋率。