哺乳動物細胞表達與純化
原核表達系統(tǒng)具有表達水平高、操作簡單、周期短、易于大規(guī)模高密度培養(yǎng)、成本低等優(yōu)點，而對于全長抗體和糖蛋白類生物藥物來說，表達產(chǎn)物多肽鏈的折疊、二硫鍵的形成、糖基化的有無以及糖基化的類型常常影響表達產(chǎn)物的合成分泌、生物活性、體內(nèi)穩(wěn)定性以及免疫原性等特性。
與其它真核細胞表達系統(tǒng)相比，目的基因在哺乳動物細胞中表達的蛋白與天然蛋白的結(jié)構(gòu)、糖基化類型和方式幾乎相同且能正確組裝成多亞基蛋白。
系統(tǒng)優(yōu)勢
- 無自產(chǎn)內(nèi)毒素；
- 可以分泌表達；
- 具有復(fù)雜的N型糖基化和準確的O型糖基化等多種翻譯后加工功能；
- 在分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和生物學(xué)功能等方面，哺乳動物細胞表達的蛋白最接近于天然蛋白。
服務(wù)優(yōu)勢
- 高性價比，價格低至至8600元起；
- 貨期短：最短35工作日即可交付；
- 產(chǎn)量高，最高可達100mg/L。
我們承諾
注：該無風險定制蛋白服務(wù)僅適用于800個氨基酸以內(nèi)的蛋白質(zhì)。如果您需要表達超過800個氨基酸的蛋白質(zhì)，我們將按步驟收費。
服務(wù)內(nèi)容
| 步驟 | 服務(wù)項目 | 服務(wù)說明 | 華美生物特色 | 周期 |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 質(zhì)粒構(gòu)建
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密碼子優(yōu)化全基因合成 | 多載體優(yōu)化 為了提高的表達成功率以及獲得更高表達量，除常規(guī)N端融合表達蛋白外，我們還提供C端融合標簽，在確保純度的同時更大程度保證了蛋白的活性。 |
8-11工作日 |
| PCR擴增產(chǎn)物酶切連接到pSec系列、pCMV系列、pCDNA等系列載體上 | ||||
| 轉(zhuǎn)化TOP10宿主 | ||||
| 獲得測序正確的重組質(zhì)粒 | ||||
| 2 | 小試表達
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轉(zhuǎn)染級重組質(zhì)粒大量制備 | 轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化 設(shè)置不同的轉(zhuǎn)染條件，根據(jù)檢測結(jié)果，選擇最優(yōu)的實驗條件。 |
3-5工作日 |
| 小體積瞬轉(zhuǎn)HEK293、CHO 等細胞 | ||||
| 檢測表達產(chǎn)物 | ||||
| 3 | 擴大表達與純化
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擴大培養(yǎng)細胞并轉(zhuǎn)染 | 多條件表達方案 根據(jù)小試表達中蛋白定位情況及最佳實驗條件，針對性選擇不同的細胞系進行懸浮或者貼壁擴大轉(zhuǎn)染，大大提高蛋白表達量。 |
6-8工作日 |
| 通過親和、離子交換、疏水及分子篩等多種層析方法純化目的蛋白 | ||||
| 4 | 其他（可選）
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通過酶切去除標簽 | 靈活的附加服務(wù)（可選） 提供多種附加服務(wù)，客戶可根據(jù)實驗需求靈活選擇 |
3個工作日 |
| 所有蛋白都可以提供無菌 操作和內(nèi)毒素去除服務(wù) |
2個工作日 | |||
| 5 | 質(zhì)控
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進行純度、濃度等檢查，并提供QC報告 | 詳細的質(zhì)控報告 為每個項目提供產(chǎn)品說明書及完善的質(zhì)控報告 |
3-5工作日 |
| 總時間 | 20-30工作日 | |||
特色技術(shù)平臺
VLPs是由多個病毒的一種或者多種衣殼蛋白自動組裝形成的納米級別的微小顆粒。VLPs顆粒不含病毒核酸，不能進行自主復(fù)制，安全性高，具有與病毒顆粒類似的整體結(jié)構(gòu)。
華美生物搭建了基于HEK293表達系統(tǒng)的包膜VLPs技術(shù)平臺，所制備的包膜VLPs在其固有的囊泡膜上顯示正確折疊的多次跨膜蛋白，展示完整的生物活性。
特色表達體系
● pSecTag2A-JT載體+HEK293細胞高效表達
- 攜帶有CMV強啟動子，含有IgK信號肽可高效分泌表達；
- N端含有10xHis較常規(guī)6xHis在IMAC中具有更強結(jié)合能力，同時含有凝血酶位點可去除標簽得到無標簽蛋白；
- C端含有MYC-tag可應(yīng)用于標簽WB檢測，較His-tag具有更強靈敏度；
- Amp抗性篩選。
案例展示
案例1：哺乳動物表達系統(tǒng)高表達目的蛋白
眾所周知，哺乳動物細胞表達量比較低，該蛋白經(jīng)過我公司的哺乳動物表達系統(tǒng)優(yōu)化表達后，將培養(yǎng)基上清進行SDS-PAGE檢測即可觀察到目的條帶，純化后經(jīng)檢測，蛋白表達量高達10mg/L。該蛋白理論分子量大小為42kDa，跑膠顯示有糖基化修飾，后經(jīng)LC-MS/MS進一步檢驗得到確認。
蛋白純化圖
泳道1：穿透液
泳道2：培養(yǎng)基原液
泳道3：Marker
泳道4：20 mM咪唑洗脫液
泳道5：60 mM咪唑洗脫液
案例2：哺乳動物表達系統(tǒng)高表達全長抗體
三種全長抗體采用我公司的載體轉(zhuǎn)染HEK293/CHO細胞后，經(jīng)SDS-PAGE檢測，可以在培養(yǎng)基上清中看到明顯的條帶，兼顧周期及產(chǎn)量，瞬轉(zhuǎn)表達產(chǎn)量可達100mg/L 。
蛋白純化圖
泳道1：抗體1培養(yǎng)基原液
泳道2：抗體1穿透液
泳道3：抗體1洗脫液
泳道4：抗體2培養(yǎng)基原液
泳道5：抗體2穿透液
泳道6：Marker
泳道7：抗體2洗脫液
泳道8：抗體3培養(yǎng)基原液
泳道9：抗體3穿透液
泳道10：抗體3洗脫液
聯(lián)系信息
電話：027-87002556
Q Q：1031906505 
地址：武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)高新大道818號高科醫(yī)療器械園B11號2樓
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