KRAS基因參與了多種實體瘤的發(fā)病，包括結(jié)直腸癌和非小細胞肺癌等，而KRAS突變的檢測有助于醫(yī)生選擇對腫瘤病人最有效的治療方法。近日，一個由中國科學家領(lǐng)導的國際團隊在《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》上發(fā)表文章，稱肽核酸鉗制PCR（PNA-PCR）技術(shù)在檢測KRAS突變上比Sanger測序更為靈敏。

這篇文章的通訊作者是軍事醫(yī)學科學院附屬醫(yī)院消化道腫瘤科主任徐建明教授。在這項研究中，中國、美國及意大利的研究人員調(diào)查了416例轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者的樣本。這些患者在2007年至2011年期間被送往軍事醫(yī)學科學院附屬醫(yī)院，并接受兩個周期或以上的化療。研究人員回顧性搜索了FFPE樣本中的KRAS突變，以及242個配對血漿樣本中的突變。

研究人員將PNA-PCR與Applied Biosystems 3100基因分析儀上的直接測序進行了比較。他們還將組織和血漿中的KRAS突變檢測與化療后的臨床結(jié)果相關(guān)聯(lián)。在FFPE腫瘤組織中，KRAS狀態(tài)與臨床反應或無進展生存期之間沒有關(guān)系。

總體考慮組織和血漿結(jié)果，兩個樣本中的野生型基因型導致整體生存期中位數(shù)長5個月，而通過PNA-PCR檢測到組織和血漿樣本中KRAS突變不一致的患者，或兩個樣本類型中都有突變的患者，生存期縮短。

此外，PNA-PCR檢測到41%合并樣本中的KRAS基因改變，而測序只檢測到30%的突變，這使得作者得出結(jié)論，PNA-PCR是一種更靈敏的檢測。與血漿相比，突變在組織中更頻繁，而在70%的病例中，血漿中的突變狀態(tài)與組織一致。5%的樣本在血漿中表現(xiàn)出突變，而在組織中沒有，作者將其稱為腫瘤異質(zhì)性。對于血漿樣本，測序的KRAS突變檢出率為17%，而PNA-PCR為31%。

研究人員認為，KRAS突變狀態(tài)與轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者的預后相關(guān)。腫瘤組織和血漿中的KRAS突變是預后不良的強大指標。

PNA-PCR這項技術(shù)利用肽核酸（peptide nucleic acids）來鉗制野生型序列的擴增。由于PNA與DNA之間的結(jié)合力很強，故結(jié)合了PNA探針的野生型序列無法擴增，而當序列發(fā)生突變時，結(jié)合力變?nèi)?，則能夠在聚合酶的作用下進行擴增。在這項研究中，PNA探針被用于抑制野生型KRAS基因的密碼子12和13的擴增。

其他研究人員也利用這項技術(shù)來檢測非小細胞肺癌以及循環(huán)無細胞DNA中的KRAS突變。美國DiaCarta公司也開發(fā)出一種類似的鉗制技術(shù)，利用的是XNA。DiaCarta的一系列試劑盒已經(jīng)通過CE認證，利用這種方法來檢測全血樣本中各種癌癥相關(guān)的突變，包括KRAS。