目前的抗病毒療法還不能治愈乙型肝炎病毒（HBV）感染，成功根除HBV需要滅活病毒的基因組，其主要存在于宿主細(xì)胞，作為游離共價閉合環(huán)狀DNA（cccDNA），在較小的范圍內(nèi)，作為染色體整合的序列。然而，新型設(shè)計酶，如CRISPR/Cas9 RNA引導(dǎo)的核酸酶系統(tǒng)，為直接攻擊HBV基因組的先進(jìn)治療策略的開發(fā)，提供了技術(shù)。用于人類治療時，這種設(shè)計酶應(yīng)該識別不同的HBV基因型，并造成最小的脫靶效應(yīng)。延伸閱讀：Nature子刊：我科學(xué)家利用CRISPR破壞乙肝病毒。

九月三日，來自德國Heinrich Pette研究所、University Medical Center Eppendorf和German Center for Infection Research (DZIF)等處的研究人員，在Nature子刊《Scientific Reports》發(fā)表的一項研究中，在HBV基因組的S和X區(qū)中確定了交叉基因型保守的HBV序列，可被Cas9切口酶靶定進(jìn)行特異性和有效的切割。這種方法不僅能破壞記者細(xì)胞系中的游離cccDNA和染色體整合HBV靶位點，而且也能破壞慢性感染和新感染肝癌細(xì)胞株中的HBV復(fù)制。這些數(shù)據(jù)表明，可以使用CRISPR/Cas9切口酶，作為HBV感染的新型治療策略。

在過去的幾年中，至少已經(jīng)開發(fā)出了三種革命性的基因組編輯技術(shù)，如ZFNs、TALENs和最近的CRISPR/Cas9 RNA引導(dǎo)的核酸酶系統(tǒng)。事實上，已有研究人員利用ZFNs、TALENs和最近的CRISPR/Cas9，在不同的檢測系統(tǒng)中獲得了對HBV的抗病毒作用。然而，除了核酸酶的最佳傳遞、循環(huán)HBV株中最佳靶位點的保守性之外，還存在潛在脫靶效應(yīng)的高度相關(guān)問題。

最近，Cas9酶的一種突變“切口酶”版本（Cas9n）已經(jīng)得以描述，它能夠基于一段共表達(dá)的引導(dǎo)RNA（gRNA）界定的靶序列（而不是野生型酶產(chǎn)生的雙鏈DNA斷裂，DSBs），在特異位點引入單鏈DNA斷裂（nick）。因此，通過Cas9切口酶（Cas9n）和一對適當(dāng)間距的gRNAs、兩個相鄰、相反的鏈缺口，可引起DSBs，并觸發(fā)易出錯的非同源末端連接（NHEJ）修復(fù)。重要的是，利用完整的鏈作為模板，不希望得到的脫靶缺口得到了精確修復(fù)。為此，雙切口方法可使靶向特異性提高1500倍。酶保真度的這一顯著提高，未來可用于Cas9核酸酶的治療應(yīng)用，如用于慢性HBV感染的治療。

在這項研究中，研究人員調(diào)查了改進(jìn)的CRISPR/Cas9切口酶系統(tǒng)，可選擇性地靶定和滅活記者細(xì)胞系和慢性感染的肝癌細(xì)胞株中的游離以及染色體整合的HBV序列。研究人員證明，HBV的S和X基因的兩個高度保守區(qū)域，可以用于Cas9n介導(dǎo)的HBV滅活，從而支持一個概念：設(shè)計酶的進(jìn)一步臨床開發(fā)，最終可能根除感染患者體內(nèi)的HBV。