背景：2002年荷蘭科學(xué)家發(fā)明了一種名為多重連接依賴(lài)的擴(kuò)增技術(shù)（muitiplex ligation-dependent probe amplication,MLPA）的高通量基因檢測(cè)方法，可在同一反應(yīng)管內(nèi)對(duì)多達(dá)45種不同的核苷酸序列進(jìn)行檢測(cè)和定量分析。至今，MLPA技術(shù)已應(yīng)用于很多領(lǐng)域，如單核苷酸多態(tài)性和基因突變檢測(cè)、基因片段缺失和重復(fù)、染色體數(shù)目異常、基因甲基化檢測(cè)及mRNA分析等等。在該方法中涉及到長(zhǎng)探針和短探針，其中長(zhǎng)探針的制備是難點(diǎn)。

方法改進(jìn)：采用PCR方法結(jié)合親和素磁珠法制備（long oligonucleotide preparation by magenetic-beads，LOPM）可用于多重連接依賴(lài)的擴(kuò)增技術(shù)的長(zhǎng)探針。通過(guò)針對(duì)目標(biāo)序列和用于制備長(zhǎng)探針的與待檢測(cè)靶片段無(wú)關(guān)的模板UT（Unrelated Template，UT），如質(zhì)粒等設(shè)計(jì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增的引物，其中的一個(gè)引物標(biāo)記進(jìn)行生物素標(biāo)記，以質(zhì)粒為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得特異長(zhǎng)度的生物素標(biāo)記的核酸序列，利用親和素磁珠進(jìn)行純化，最終制備長(zhǎng)度特異的單鏈寡核苷酸（非生物素標(biāo)記）。利用親和素磁珠法制備MLPA長(zhǎng)探針的方法如圖1。

結(jié)果：采用PCR方法結(jié)合親和素磁珠法制備可用于多重連接擴(kuò)增技術(shù)的長(zhǎng)探針能根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求制備任意長(zhǎng)度的長(zhǎng)探針，不僅大大降低了探針設(shè)計(jì)的難度，同時(shí)避免了噬菌體培養(yǎng)和雙酶切等耗時(shí)長(zhǎng)、成本高等復(fù)雜的操作過(guò)程，使得普通的實(shí)驗(yàn)室也能順利進(jìn)行MLPA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。