評(píng)估干細(xì)胞的多能狀態(tài)
日期:2011-05-09 08:31:16
胚胎干細(xì)胞具備分化成多種細(xì)胞類型的潛能,并被普遍認(rèn)為有著重要的醫(yī)療前景。干細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量決定了它有效產(chǎn)生分化細(xì)胞類型的能力,這可以通過對(duì)多能表型的分子標(biāo)記的表達(dá)進(jìn)行分析來測(cè)定。早期譜系限制性細(xì)胞的標(biāo)記也能用于確定在干細(xì)胞培養(yǎng)物中是否存在分化的細(xì)胞,并能表明分化細(xì)胞所代表的譜系通路。
R&D Systems提供的人類多能干細(xì)胞評(píng)估引物對(duì)(圖1),可用于檢測(cè)評(píng)估14種基因的mRNA轉(zhuǎn)錄本。這14種基因經(jīng)常作為未分化細(xì)胞和早期譜系限制性人胚胎干細(xì)胞的分子鑒定標(biāo)記。該產(chǎn)品還包含人類GAPDH的引物對(duì),可作為對(duì)照用于驗(yàn)證cDNA合成是否成功。此外產(chǎn)品還包含了一個(gè)陽性對(duì)照。另外,R&D Systems還提供了這個(gè)試劑盒的小鼠/大鼠版本。
R&D Systems還提供其他試劑來評(píng)估干細(xì)胞表型。例如,通過流式細(xì)胞儀來檢測(cè)未分化的NTera2人畸胎癌細(xì)胞中Oct 3/4的表達(dá)(圖2),通過免疫細(xì)胞化學(xué)來檢測(cè)小鼠D3胚胎干細(xì)胞核中DPPA4的表達(dá)(圖3)。
分析物 | ||
1. DNA marker 2. Negative control 3. DPPA5/ESG1 4. Nanog 5. Oct3/4 6. SOX2 7. Nestin |
8. Otx2 9. TP63 10. AFP 11. GATA-4 12. PDX-1 13. SOX17 14. HNF-3 beta |
15. Brachyury 16. Stella 17. GAPDH 18. Positive control 19. DNA marker |
圖1. 用干細(xì)胞多能和譜系限制的14種不同分子標(biāo)記的引物對(duì)進(jìn)行擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳。用于擴(kuò)增的cDNA來源于多種胚胎組織。條帶3-6的標(biāo)記表達(dá)于未分化的胚胎干細(xì)胞,條帶6-9是外胚層譜系,條帶10-14是內(nèi)胚層譜系,條帶15是中胚層譜系,條帶16包含生殖細(xì)胞的標(biāo)記。1,2.17-19條帶都是對(duì)照。
圖2. 通過流式細(xì)胞儀對(duì)NTera2細(xì)胞中Oct3/4的表達(dá)進(jìn)行評(píng)估。用大鼠抗人/小鼠的Oct3/3單克隆抗體(橙色)或同型對(duì)照(灰色)作為一抗,接著使用APC結(jié)合的二抗。
圖3. 利用 R&D Systems的抗小鼠DPPA4多克隆抗體和 R&D Systems Northern Lights™ 557結(jié)合的二抗來檢測(cè)D3細(xì)胞核中的DPPA4。
此外,R&D Systems還提供了間充質(zhì)干細(xì)胞功能鑒定試劑盒。它能根據(jù)小鼠BMSC/MSC分化成多種間充質(zhì)細(xì)胞的能力從而鑒定它們。這個(gè)試劑盒包含了特殊配方的培養(yǎng)基補(bǔ)劑,能有效誘導(dǎo)BMSC/MSC分化成脂肪生成細(xì)胞、軟骨形成細(xì)胞或成骨細(xì)胞。試劑盒中還包含了一組抗體,包括羊抗小鼠的FABP4,羊抗小鼠的膠原蛋白II,以及羊抗小鼠的骨橋素,用于評(píng)估成熟細(xì)胞的表型。
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