印跡技術(shù)

1975，Edwen Southern提出分子印跡概念。

概念：將存在于凝膠中的生物大分子轉(zhuǎn)移（印跡）于固定化介質(zhì)上并加以檢測(cè)分析的技術(shù)。目前主要應(yīng)用于DNA,RNA，蛋白質(zhì)的檢測(cè)。

蛋白質(zhì)免疫印跡法

Western blotting: 免疫印跡法是檢測(cè)蛋白質(zhì)混合溶液中某種特定目的蛋白質(zhì)的定性方法，也可以作為確定同一蛋白質(zhì)在不同細(xì)胞或者同一種細(xì)胞不同條件下的相對(duì)含量的半定量方法。由于其檢測(cè)往往需要抗體，所以也被稱為免疫印跡技術(shù)。

應(yīng)用

1 檢測(cè)樣品中特異蛋白存在與否

2 細(xì)胞中特異蛋白的半定量分析

3 蛋白質(zhì)分子相互作用的研究

實(shí)驗(yàn)操作

1 細(xì)胞裂解物的準(zhǔn)備；

2 細(xì)胞裂解物的蛋白定量；

3 細(xì)胞裂解物的SDS-PAGE；

4 蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移；

6 目的蛋白質(zhì)的檢測(cè)。

免疫印跡只能檢測(cè)目的蛋白的相對(duì)含量

測(cè)定相對(duì)含量時(shí)，需要內(nèi)參照

選擇合適的反應(yīng)條件：SDS-PAGE膠濃度；轉(zhuǎn)移膜的選擇；轉(zhuǎn)移時(shí)間的選擇

注意電極的正負(fù)極

抗體反應(yīng)時(shí)，注意驅(qū)除反應(yīng)袋內(nèi)氣泡

操作要輕柔。