細(xì)胞生存條件
日期:2010-07-30 15:33:46
1、基本營養(yǎng)物質(zhì)
(1)糖
六碳糖主要能源、維持滲透壓,含葡萄糖1-5%。
(2)氨基酸
維持生存需12種氨基酸(精、胱、亮、異亮、賴、蛋、苯丙、蘇、色、組、酪、纈)。谷氨酰胺需量最大,缺乏時(shí)細(xì)胞生長不良。
單細(xì)胞培養(yǎng)或細(xì)胞量少時(shí),所需氨基酸的種類和量增多,細(xì)胞主要利用左旋氨基酸異構(gòu)體。
(3)維生素
細(xì)胞大部分需水溶性B族維生素,Vitc不可少,1-10mg/100ml可促進(jìn)正常細(xì)胞生長繁殖。
2、促生長因子、激素類物質(zhì)
3、其它物質(zhì)
基本元素、微量元素、促細(xì)胞貼附物質(zhì)(纖粘連蛋白、層粘連蛋白laminin、IV型膠原、氨基多糖類)
4、水
主要成分和生存環(huán)境,要求高純度水。
5、溫度
哺乳動(dòng)物及人源細(xì)胞最適培養(yǎng)溫度為35℃—37℃,對低溫耐受力比高溫強(qiáng)。39℃以上受損→死亡;不低于0℃時(shí)(0℃-34℃),細(xì)胞能生存,但代謝降低、分裂延緩。
6、氣體環(huán)境和pH
需O2、CO2,通氧量過大對細(xì)胞有毒害。
CO2主要與維持pH有關(guān),細(xì)胞培養(yǎng)最佳pH為7.2—7.4,通過緩沖系統(tǒng)和調(diào)節(jié)CO2含量,維持正常pH。
開放培養(yǎng)要求5%CO2環(huán)境、HEPES(羥乙基哌嗪乙硫磺酸)10—50mmol/ml可防止pH變化。
含Earle’s緩沖系統(tǒng)的培養(yǎng)基適合于5%CO2的培養(yǎng)條件,Hanks’緩沖系統(tǒng)的培養(yǎng)基僅含有0.35g/L NaHCO3,不能用于5%CO2的環(huán)境,若放入CO2培養(yǎng)箱,溶液將迅速變酸,使用時(shí)應(yīng)注意。
7、濕度和光
開放培養(yǎng)相對濕度控制在95%。細(xì)胞培養(yǎng)需避光,紫外線或可見光可造成核黃素、酪氨酸、色氨酸等產(chǎn)生有毒的光產(chǎn)物,抑制細(xì)胞生長,降低其貼壁能力。
8、影響細(xì)胞生長的其它因素
接觸橡膠用品、收集細(xì)胞時(shí)離心速度過大、細(xì)胞接種濃度過低等。
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