分離樹(shù)突狀細(xì)胞的新工具
日期:2011-04-28 08:25:22
樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)為先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)提供了關(guān)鍵性的聯(lián)系。這些特化細(xì)胞具有捕獲、處理、并將抗原呈遞給原態(tài)T細(xì)胞以促進(jìn)其分化和激活的能力。盡管所有的樹(shù)突狀細(xì)胞都能夠呈遞抗原,但它們卻是一個(gè)異質(zhì)性的細(xì)胞群。幾種樹(shù)突狀細(xì)胞亞群已經(jīng)鑒定出,它們?cè)谖恢谩⒈硇秃兔庖吖δ苌细鞑幌嗤?。這種可塑性使得它們?cè)诔蔬f不同微生物抗原或損傷細(xì)胞成分時(shí)有差異地形成免疫反應(yīng)。
人類(lèi)血液中大約1-10%的外周血單核細(xì)胞(PBMC)為樹(shù)突狀細(xì)胞。相對(duì)低豐度的獨(dú)特標(biāo)記物和不斷發(fā)現(xiàn)的新亞群,使得分離樹(shù)突狀細(xì)胞進(jìn)行功能研究成為了一個(gè)挑戰(zhàn)。
為了解決這一難題,R&D Systems開(kāi)發(fā)出一種負(fù)選試劑盒,能夠富集從人類(lèi)血液中分離出的樹(shù)突狀細(xì)胞。與正選試劑盒不同,MagCellect Human Blood DC Isolation Kit讓分離出的樹(shù)突狀細(xì)胞群未被觸碰,減少了細(xì)胞在分選過(guò)程中發(fā)生改變的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)用MagCellect Kit分離出的樹(shù)突狀細(xì)胞群進(jìn)行流式細(xì)胞分析,證實(shí)超過(guò)90%的細(xì)胞均為CD14–CD19–BDCA1+BDCA2+BDCA3+ (圖1A)。其中2-8%為BDCA2+CD45+漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞(pDC;圖1B),82-88%為髓樣樹(shù)突狀細(xì)胞(mDC)。mDC細(xì)胞群中有20-40%為BDCA1+CD11c+,20-40%為BDCA3+CD11c+,10-20%為CD16+CD11c+,10-25%為CD56+MHCII+,表明MagCellect Kit能夠分離最近鑒定出的CD56+和CD16+ mDC亞群(圖1C和1D)。
圖1. 利用流式細(xì)胞儀對(duì)MagCellect Human Blood Dendritic Cell Isolation Kit分離出的樹(shù)突狀細(xì)胞進(jìn)行分析。MagCellect Human Blood Dendritic Cell Isolation Kit可以富集來(lái)自人類(lèi)血液樣品的所有樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)。利用圖示的抗體通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同的樹(shù)突狀細(xì)胞亞群,富集前(上圖)和富集后(下圖)。A. 利用抗CD14、抗CD19、抗CD1c/BDCA1、抗DLEC/BDCA2和抗Thrombomodulin/BDCA3抗體檢測(cè)所有樹(shù)突狀細(xì)胞。B. 利用抗DLEC/BDCA2和抗CD45抗體檢測(cè)漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞(pDC)。C. 利用抗CD56和抗MHCII抗體檢測(cè)CD56+MHCII+髓樣樹(shù)突狀細(xì)胞(mDC)。D. 利用抗CD16和抗CD11c抗體檢測(cè)CD16+CD11c+ mDC。所檢測(cè)亞群的百分比可能隨供體不同而變化。
對(duì)富集的全部DC細(xì)胞群的功能分析證實(shí),分離出的細(xì)胞維持了在混合白細(xì)胞反應(yīng)中激活異基因T細(xì)胞增殖的能力。由于分離出的樹(shù)突狀細(xì)胞在整個(gè)富集過(guò)程中未被抗體觸碰,所以它們有可能比用正選技術(shù)分離出的細(xì)胞保留了更多的功能特性。此外,MagCellect Kit通過(guò)兩種抗體混合物來(lái)標(biāo)記不想要的細(xì)胞,無(wú)需分離柱,比其他試劑盒更為易用。R&D Systems新推出的MagCellect Human Blood Myeloid Dendritic Cell Isolation Kit也具有類(lèi)似的優(yōu)點(diǎn)。