1   細菌的生長狀態(tài)：實驗中應密切注視細菌的生長狀態(tài)和密度，盡量使用對數(shù)生長期的細胞（一般通過檢測OD600來控制。DH5?菌株OD600為0.5時細胞密度是5×107/ml）；

2   所有操作均應在無菌條件和冰上進行；

3   經CaCl2處理的細胞，在低溫條件下，一定的時間內轉化率隨時間的推移而增加，24小時達到最高，之后轉化率再下降（這是由于總的活菌數(shù)隨時間延長而減少造成的）；

4   化合物及無機離子的影響：在Ca2+的基礎上聯(lián)合其他二價金屬離子（如Mn2+或Co2+）、DMSO或還原劑等物質處理細菌，可使轉化效率大大提高（100-1000倍）；

5   所使用的器皿必須干凈。跡量的去污劑或其它化學物質的存在可能大大降低細菌的轉化效率；

6  質粒的大小及構型的影響：用于轉化的應主要是超螺旋的DNA；

7  一定范圍內，轉化效率與外源DNA的濃度呈正比；