抗地高辛單克隆抗體制備

日期：2023-05-19 11:47:40

抗原是觸發(fā)體內(nèi)免疫反應(yīng)的物質(zhì)，其中抗原可以是蛋白質(zhì)、多糖、小分子和核酸等。制備單克隆抗體對(duì)于表達(dá)和檢測(cè)目標(biāo)蛋白具有重要意義?？沟馗咝羻慰寺】贵w是一種常用的單克隆抗體，下面將介紹其制備過(guò)程。

1、抗原提取

首先需要從所需的生物標(biāo)本（如細(xì)胞、組織、血清等）中提取目標(biāo)蛋白作為抗原。具體操作包括：

① 根據(jù)目標(biāo)蛋白的特性選擇合適的樣品來(lái)源。

② 使用適宜的提取緩沖液進(jìn)行組織或細(xì)胞的破碎，然后離心取得上清液，也可使用尿毒癥肝素絲片對(duì)血清進(jìn)行蛋白質(zhì)分離。

③ 對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行純化和濃縮，以提高抗原的濃度和純度。

2、免疫原制備

將提取出來(lái)的純化目標(biāo)蛋白質(zhì)與佐劑混合，制備成免疫原。這里常用的佐劑包括弱抗原、FCA、FIA等。尤其是對(duì)于小分子抗原或表達(dá)量較低的蛋白質(zhì)，可以使用自己提供的激素做為佐劑來(lái)提升免疫原的效果。

3、免疫動(dòng)物的選擇和免疫

通常情況下，兔子和小鼠是最常用的免疫動(dòng)物，免疫前必須進(jìn)行一些預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定最佳免疫方案。過(guò)程如下：

① 對(duì)預(yù)定免疫動(dòng)物進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，檢查是否存在自身特異性抗體，可使用例如馬血球凝集素等試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。

② 規(guī)劃出合適的免疫方案，包括佐劑的選擇、抗原的劑量、免疫間隔時(shí)間等。并制備免疫液用于免疫動(dòng)物。

③ 將免疫液注射到免疫動(dòng)物體內(nèi)，注射方式有肌肉注射、皮下注射等，可根據(jù)免疫動(dòng)物特點(diǎn)選擇相應(yīng)注射方法。

4、融合細(xì)胞的制備

將免疫動(dòng)物的淋巴細(xì)胞與惡性腫瘤細(xì)胞融合，形成雜交瘤。這一步操作需要使用40%和50%的PEG，使免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞緊密結(jié)合、融合，最后篩選出單克隆雜交瘤細(xì)胞株。

5、單克隆抗體分離和純化

將篩選出來(lái)的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，通過(guò)限制性稀釋法進(jìn)行單克隆分離和擴(kuò)增，最終獲得足夠的單克隆抗體。對(duì)于地高辛單克隆抗體的制備，需要采用特定的親和層析柱吸附方法，將地高辛單克隆抗體從其他組分中分離純化。

抗地高辛單克隆抗體的制備需要仔細(xì)規(guī)劃免疫方案，選取合適的免疫動(dòng)物和佐劑，并在制備過(guò)程中注重穩(wěn)定性和純度。