單克隆抗體的純化工藝流程步驟
日期：2023-06-27 15:36:33
單克隆抗體的純化工藝流程通常包括以下步驟：
一、細(xì)胞培養(yǎng)和收獲：
1. 將表達(dá)單克隆抗體的細(xì)胞（通常是哺乳動物細(xì)胞株）培養(yǎng)在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中。
2. 監(jiān)測細(xì)胞密度和生長情況，確保達(dá)到最佳表達(dá)水平。
3. 當(dāng)細(xì)胞達(dá)到一定密度時，收獲細(xì)胞，通常通過離心將細(xì)胞分離出來。
二、細(xì)胞破碎和固態(tài)物去除：
1. 使用適當(dāng)?shù)钠扑榉椒ǎㄈ绯暡?、高壓等）破碎收獲的細(xì)胞，釋放細(xì)胞內(nèi)的單克隆抗體。
2. 除去細(xì)胞碎片和固態(tài)物質(zhì)，如細(xì)胞壁殘留、脂質(zhì)、核酸等，可通過離心和過濾等步驟實(shí)現(xiàn)。
三、親和層析：
1. 準(zhǔn)備含特異性配體的親和層析柱，配體可以是與單克隆抗體特異結(jié)合的蛋白、蛋白G/A等。
2. 將破碎后的細(xì)胞上清液通過親和柱，使單克隆抗體與配體結(jié)合。
3. 通過洗脫步驟，使用適當(dāng)?shù)南疵搫ㄈ绲蚿H、高鹽、可競爭性配體等）將單克隆抗體從柱上洗脫。
四、離子交換層析：
1. 將洗脫的樣品加載到離子交換層析柱上，根據(jù)單克隆抗體的等電點(diǎn)和親和性進(jìn)行分離。
2. 使用不同梯度的鹽濃度或pH值，逐漸洗脫不同的蛋白質(zhì)成分，將單克隆抗體分離純化。
五、尺寸排阻層析：
1. 將經(jīng)過離子交換層析的樣品加載到尺寸排阻層析柱上。
2. 根據(jù)分子大小，通過柱上的多孔素材選擇性地分離和洗脫目標(biāo)單克隆抗體。
六、濃縮和 Buffer 調(diào)整：
1. 使用適當(dāng)?shù)臐饪s方法（如超濾、沉淀等）濃縮純化后的單克隆抗體樣品。
2. 調(diào)整樣品的緩沖液，以適應(yīng)后續(xù)的儲存、分析或制劑的要求。
七、純化檢測和分析：
1. 對純化后的單克隆抗體樣品進(jìn)行質(zhì)量分析，如SDS-PAGE凝膠電泳、Western blot等。
2. 測定單克隆抗體的濃度和純度，可以使用光譜法（如280 nm吸光度法）和蛋白質(zhì)定量方法（如Bradford法）進(jìn)行。
這些步驟可以根據(jù)需要進(jìn)行優(yōu)化和調(diào)整，具體的純化工藝流程可能會因目標(biāo)單克隆抗體的特性和實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況而有所不同。
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