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單克隆抗體制備過程中雜交瘤細胞的篩選原理

日期：2023-08-08 15:22:35

在單克隆抗體制備過程中，雜交瘤細胞的篩選是非常重要的步驟，它用于選擇并生產(chǎn)能夠產(chǎn)生特定單克隆抗體的雜交瘤細胞。下面是雜交瘤細胞篩選的原理：

? 免疫反應：首先，動物（通常是小鼠）被免疫以激發(fā)其免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特定抗原的抗體。這個抗原可以是純化的蛋白質(zhì)、多肽或其他分子。

? 脾細胞提取：免疫后，從動物的脾臟中獲取脾細胞。脾臟是免疫反應產(chǎn)生大量抗體的主要器官。

? 癌細胞融合：脾細胞與一種稱為骨髓瘤細胞（常用的是骨髓瘤細胞系SP2/0或NS0）的癌細胞進行融合。這種融合通過使用聚乙二醇（PEG）或電脈沖等方法實現(xiàn)。

? 雜交瘤細胞選擇：融合后的細胞形成雜交瘤，稱為雜交瘤細胞。這些細胞具有兩個來源的細胞核，包括脾細胞的抗體產(chǎn)生機制和癌細胞的無限增殖能力。

? 雜交瘤細胞篩選：為了篩選出能夠產(chǎn)生特定單克隆抗體的雜交瘤細胞，可以通過以下方法進行篩選：

? HAT培養(yǎng)基選擇：使用含有嘌呤類似物（如氨基乙酰吡胺，H）和嘧啶類似物（如氯乙酸乙酯，A）的培養(yǎng)基（稱為HAT），這種培養(yǎng)基可以選擇只有雜交瘤細胞才能在其中存活和增殖，因為它們是兩種親本細胞的雜交體，而親本細胞對HAT培養(yǎng)基中的一種成分缺乏代謝能力。

? 免疫篩選：將培養(yǎng)的雜交瘤細胞分裝到多孔板中，并添加包含目標抗原的固相（如蛋白質(zhì)或多肽）。

? 酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）：通過檢測雜交瘤細胞培養(yǎng)上清中特定抗體的存在，可以進行篩選。

? 通過以上篩選方法，能夠選擇出產(chǎn)生特定單克隆抗體的雜交瘤細胞，并進行大規(guī)模培養(yǎng)，最終獲得目標單克隆抗體。這些單克隆抗體具有很高的特異性和親和力，可應用于醫(yī)學診斷、治療和研究等領域。