elisa抗體阻斷實(shí)驗(yàn)原理
日期：2023-09-08 15:51:00
ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)抗體阻斷實(shí)驗(yàn)是一種常用的方法，用于檢測和驗(yàn)證抗體對特定抗原的特異性結(jié)合能力。其原理如下：
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：將目標(biāo)抗原固定在固相（如微孔板）上，并進(jìn)行非特異性結(jié)合位點(diǎn)的封閉，以避免后續(xù)步驟中非特異性背景信號的干擾。
樣品處理：將待測抗體與目標(biāo)抗原預(yù)先混合，并孵育一段時間，使其形成抗原-抗體復(fù)合物。
反應(yīng)與洗滌：將混合物加入已經(jīng)固定了目標(biāo)抗原的微孔板中，使復(fù)合物與固相上的抗原結(jié)合。然后進(jìn)行多次洗滌，去除非特異性的未結(jié)合物質(zhì)。
抗體標(biāo)記物添加：加入與待測抗體不競爭的標(biāo)記物標(biāo)記的第二抗體或探針抗體。該抗體會結(jié)合到待測抗體的Fc區(qū)域。
酶標(biāo)記物的反應(yīng)與洗滌：加入酶標(biāo)記物底物，使酶產(chǎn)生染色反應(yīng)。此時，標(biāo)記物所在的位置與酶活性成正比。
反應(yīng)停止與測量：通過加入染色反應(yīng)停止劑，停止酶反應(yīng)，并阻斷染色產(chǎn)物生成。利用光譜法或比色法測量吸光度，即可定量分析待測抗體的阻斷效果。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和需要，可以將該方法用于血清、細(xì)胞上清液、組織勻漿等樣品中的待測抗體的特異性結(jié)合能力檢測與驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可用于評估抗體的親和力、特異性以及其對其他類似抗原的交叉反應(yīng)性。
