重組抗體表達(dá)載體構(gòu)建方法
日期：2023-10-18 16:31:20
重組抗體表達(dá)載體的構(gòu)建方法可以分為以下幾個(gè)步驟：
基因克隆：將需要表達(dá)的靶向抗體的輕鏈和重鏈的基因從目標(biāo)細(xì)胞中分離出來(lái)，或通過(guò)合成化學(xué)方法獲得。
插入載體：將輕鏈和重鏈的基因分別插入到表達(dá)載體中，常見(jiàn)的載體包括質(zhì)粒、病毒、細(xì)胞質(zhì)體等。
轉(zhuǎn)染表達(dá)：將載有抗體基因的載體導(dǎo)入到宿主細(xì)胞中，常用的轉(zhuǎn)染方法包括質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、病毒感染等。
誘導(dǎo)表達(dá)：通過(guò)添加適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)劑，啟動(dòng)抗體基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)，通常使用培養(yǎng)基或小分子化合物作為誘導(dǎo)劑。
純化抗體：用合適的純化方法純化從宿主細(xì)胞中表達(dá)的抗體，例如親和層析、尺寸排除層析、離子交換層析等技術(shù)。
驗(yàn)證功能：確定表達(dá)的抗體是否具有靶向特異性和生物活性。這可能包括ELISA、Western blot、流式細(xì)胞術(shù)等多種方法。
通過(guò)這些步驟，可以構(gòu)建出高效表達(dá)、純化和活性驗(yàn)證的重組抗體載體。
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