重組抗體片段的表達和純化

日期：2023-12-05 15:34:25

重組抗體片段的表達和純化是生物技術領域的一個重要方面，尤其在藥物開發(fā)和研究中有著廣泛應用。重組抗體片段包括單鏈變異片段（scFv）、單域抗體（sdAb）、Fab片段等。這些片段通常通過基因工程方法在宿主細胞中表達，然后通過一系列步驟進行純化。以下是重組抗體片段表達和純化的一般過程：

一、表達

? 基因克?。菏紫仍O計并合成包含抗體片段編碼序列的基因構建，將其克隆到適當?shù)谋磉_載體中。

? 宿主選擇：選擇合適的宿主細胞進行表達。常見的宿主細胞包括大腸桿菌（E. coli）、酵母、昆蟲細胞和哺乳動物細胞等。每種宿主系統(tǒng)都有其優(yōu)勢和局限性，例如，E. coli表達系統(tǒng)操作簡單、成本低，但可能不適合復雜的糖基化修飾；而哺乳動物細胞則能進行較為復雜的后翻譯修飾。

? 轉染和表達：將表達載體轉染到宿主細胞中，并在適宜的條件下誘導抗體片段的表達。

? 培養(yǎng)和收獲：在適當?shù)呐囵B(yǎng)條件下擴增宿主細胞，并在表達達到峰值時收獲細胞或細胞上清，以獲取含有重組抗體片段的樣品。

二、純化

? 裂解（如果需要）：如果抗體片段在宿主細胞內(nèi)部表達，需要對細胞進行裂解以釋放抗體片段。

? 初步純化：通常使用親和層析作為第一步純化手段，利用抗體片段Fc部分與蛋白A或蛋白G的高親和力進行特異性結合。如果抗體片段沒有Fc區(qū)域，可以設計一個帶有標簽（如His標簽）的表達載體，利用金屬親和層析進行純化。

? 洗脫：通過改變緩沖液的pH或離子強度，將抗體片段從親和層析介質(zhì)上洗脫下來。

? 進一步純化：為了提高純度，可能還需要進行離子交換層析、凝膠過濾層析、親水相互作用層析等其他層析步驟。

? 緩沖液交換和濃縮：通過透析或超濾技術將抗體片段轉移到適當?shù)木彌_液中，并濃縮至所需的濃度。

? 質(zhì)量控制：通過SDS-PAGE、西方印跡、ELISA等方法對純化的抗體片段進行質(zhì)量控制，確保其純度和活性。

? 保存：將純化的抗體片段在適當條件下保存，如-80°C冷凍保存或添加穩(wěn)定劑并在4°C下保存。

? 整個過程需要根據(jù)具體的抗體片段和應用目的進行優(yōu)化，以確保最終產(chǎn)品的純度、產(chǎn)量和生物活性滿足要求。