抗體定制服務(wù)包括哪些內(nèi)容？

日期：2024-11-18 13:11:15

抗體定制服務(wù)是一個較為復(fù)雜的領(lǐng)域，主要包括以下幾個方面的內(nèi)容：

抗體類型定制有哪些？

1、單克隆抗體定制

抗原制備：首先需要客戶提供目標(biāo)抗原或者服務(wù)方幫助客戶制備抗原。例如，如果目標(biāo)是一種新型病毒蛋白，就需要通過基因工程表達(dá)系統(tǒng)（如大腸桿菌、哺乳動物細(xì)胞等）來生產(chǎn)足夠量的、具有免疫原性的抗原蛋白。

動物免疫：將抗原注射到合適的動物體內(nèi)，最常用的是小鼠。根據(jù)抗原的性質(zhì)和實驗要求，設(shè)計合理的免疫方案，包括免疫劑量、免疫途徑（如皮下注射、腹腔注射等）和免疫時間間隔等。例如，對于一些小分子抗原，可能需要與載體蛋白偶聯(lián)后再進(jìn)行免疫，并且需要多次加強免疫來刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生足夠的、針對目標(biāo)抗原的 B 淋巴細(xì)胞。

細(xì)胞融合與篩選：在動物體內(nèi)產(chǎn)生足夠的免疫反應(yīng)后，取出脾臟細(xì)胞（其中含有產(chǎn)生抗體的 B 淋巴細(xì)胞）與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。通過特殊的篩選培養(yǎng)基（如 HAT 培養(yǎng)基），篩選出融合成功的雜交瘤細(xì)胞。這些雜交瘤細(xì)胞既具有 B 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力，又具有骨髓瘤細(xì)胞無限增殖的特性。

單克隆抗體的生產(chǎn)與純化：篩選出能穩(wěn)定分泌目標(biāo)抗體的雜交瘤細(xì)胞株后，進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。可以采用體外培養(yǎng)方式，如在細(xì)胞培養(yǎng)瓶或者生物反應(yīng)器中培養(yǎng)；也可以將細(xì)胞接種到動物體內(nèi)（如小鼠腹腔），讓其產(chǎn)生腹水來獲得大量抗體。最后，通過蛋白純化技術(shù)（如親和層析、離子交換層析等）得到高純度的單克隆抗體。

2、多克隆抗體定制

抗原準(zhǔn)備工作同單克隆抗體：抗原的質(zhì)量和特性同樣會影響多克隆抗體的質(zhì)量。例如，對于復(fù)雜的抗原（如全細(xì)胞、組織提取物等），其成分的多樣性會導(dǎo)致動物產(chǎn)生針對多種抗原表位的抗體。

動物免疫策略調(diào)整：免疫動物的選擇范圍更廣，除小鼠外，還可以是兔子、山羊等。免疫劑量和時間間隔根據(jù)動物種類和抗原性質(zhì)有所不同。一般來說，多克隆抗體的免疫周期可能相對較短，但需要考慮不同動物的免疫反應(yīng)差異。

血清收集與抗體純化：在免疫過程結(jié)束后，收集動物血清。血清中含有多種抗體，是多克隆抗體的粗提物。可以通過鹽析、親和層析等方法對血清中的抗體進(jìn)行純化，以滿足不同的實驗需求。例如，對于一些對抗體純度要求較高的實驗（如免疫組化），可能需要采用多種純化方法相結(jié)合，以去除血清中的雜質(zhì)蛋白和其他無關(guān)成分。

3、抗體標(biāo)記定制

熒光標(biāo)記抗體定制：根據(jù)客戶的實驗需求，如細(xì)胞成像、流式細(xì)胞術(shù)等，選擇合適的熒光染料（如 FITC、PE、Cy3、Cy5 等）對抗體進(jìn)行標(biāo)記。標(biāo)記過程需要精確控制反應(yīng)條件，包括染料與抗體的比例、反應(yīng)時間、溫度和 pH 值等，以確保標(biāo)記效率和抗體活性。例如，在進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面抗原時，需要使用熒光標(biāo)記抗體，標(biāo)記后的抗體能夠特異性地結(jié)合到細(xì)胞表面的目標(biāo)抗原上，通過流式細(xì)胞儀檢測熒光信號，從而實現(xiàn)對細(xì)胞亞群的分析。

酶標(biāo)記抗體定制：對于免疫檢測實驗（如 ELISA、免疫組化等），常用酶標(biāo)記抗體來進(jìn)行信號放大和檢測。常見的標(biāo)記酶有辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（AP）。標(biāo)記過程涉及到化學(xué)交聯(lián)方法，將酶分子與抗體分子共價結(jié)合，同時要避免影響抗體的抗原結(jié)合活性和酶的催化活性。例如，在 ELISA 實驗中，酶標(biāo)記抗體與抗原 - 固定抗體復(fù)合物結(jié)合后，加入相應(yīng)的酶底物，通過酶催化底物產(chǎn)生顏色變化來定量檢測抗原。

放射性同位素標(biāo)記抗體定制：在一些特殊的醫(yī)學(xué)診斷和研究（如腫瘤的放射性免疫顯像）中，需要使用放射性同位素標(biāo)記抗體。標(biāo)記過程需要特殊的設(shè)備和技術(shù)人員操作，確保標(biāo)記的準(zhǔn)確性和安全性。例如，碘 - 131 標(biāo)記的抗體可以用于甲狀腺癌的診斷和治療，利用抗體對甲狀腺癌細(xì)胞表面抗原的特異性結(jié)合，將放射性物質(zhì)帶到腫瘤部位，實現(xiàn)對腫瘤的定位和治療。

4、抗體片段定制

Fab 片段定制：通過酶切完整抗體（如木瓜蛋白酶），可以獲得抗原結(jié)合片段（Fab）。定制過程包括選擇合適的酶切條件，以確保高效產(chǎn)生 Fab 片段，并且要通過純化步驟去除酶和其他雜質(zhì)。Fab 片段具有完整抗體的抗原結(jié)合活性，但分子量較小，在一些組織穿透性要求高的實驗（如體內(nèi)腫瘤成像）中有優(yōu)勢。

F (ab')?片段定制：用胃蛋白酶酶切抗體可得到 F (ab')?片段，它含有兩個抗原結(jié)合位點，相對 Fab 片段在抗原結(jié)合上可能具有更強的親和力。在定制過程中同樣要關(guān)注酶切條件和后續(xù)純化，并且這種片段在某些免疫檢測中能夠減少非特異性結(jié)合，提高檢測的特異性。

5、抗體親和力成熟定制

定點突變技術(shù)：通過對抗體基因進(jìn)行定點突變，改變抗體可變區(qū)的氨基酸序列，然后篩選出親和力提高的突變體。例如，根據(jù)抗體與抗原結(jié)合的晶體結(jié)構(gòu)信息，確定可能影響親和力的關(guān)鍵氨基酸殘基，對其進(jìn)行突變，構(gòu)建突變體庫，再利用噬菌體展示、酵母展示等技術(shù)篩選高親和力突變體。

鏈替換技術(shù)：將抗體的輕鏈或重鏈進(jìn)行替換，構(gòu)建新的抗體組合，從中篩選出親和力增強的抗體。這一過程涉及到基因工程操作和高通量篩選方法，以快速篩選出具有理想親和力的抗體。例如，在噬菌體展示技術(shù)平臺上，將不同來源的輕鏈基因與固定的重鏈基因組合，構(gòu)建輕鏈替換文庫，通過抗原篩選得到親和力更高的抗體。