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三種方法提取血清外泌體的比較研究

日期:2023-05-26 11:12:39


    外泌體包含了多種生物活性分子,如RNA、蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物等。血清外泌體中的這些成分對(duì)于疾病的診斷和治療等方面有著廣泛的應(yīng)用前景。本文將介紹三種方法提取血清外泌體的比較研究,希望為相關(guān)研究提供參考。

外泌體提取

 
1、速離心法

    超速離心法是目前最常用的一種提取血清外泌體的方法。具體操作步驟如下:
 
    (1) 取血液樣品,離心去除細(xì)胞和碎片,獲得血漿;
 
    (2) 對(duì)血漿使用不同的離心參數(shù)和時(shí)間進(jìn)行超速離心,以獲取外泌體團(tuán)塊;
 
    (3) 經(jīng)過(guò)再次離心和洗滌,用PBS緩沖液再次懸浮外泌體團(tuán)塊以獲取純凈外泌體。
 
    
超速離心法 徑濾膜法操作簡(jiǎn)單,適用于大規(guī)模制備,但存在一定的缺點(diǎn)。首先,因?yàn)槌匐x心的原理是根據(jù)體積和密度分離,所以無(wú)法完全區(qū)分出外泌體和其他蛋白質(zhì)團(tuán)塊;其次,超速離心所需的離心機(jī)較為昂貴,不適用于一些小型實(shí)驗(yàn)室。
 
2、徑濾膜法

    大孔徑濾膜法是通過(guò)篩選外泌體大小進(jìn)行提取。具體操作步驟如下:
 
    (1) 取血液樣品,離心去除細(xì)胞和碎片,獲得血漿;
 
    (2) 在血漿中加入大孔徑濾膜(如0.22um或0.45um),進(jìn)行過(guò)濾,獲得外泌體富集的濾液;
 
    (3) 通過(guò)再次過(guò)濾和洗滌,用PBS緩沖液再次懸浮外泌體以獲取純凈外泌體。
 

    徑濾膜法操作簡(jiǎn)便,適用于小規(guī)模制備,但其缺點(diǎn)在于不能直接對(duì)外泌體進(jìn)行定量檢測(cè)。
 
3、親和法

    免疫親和法是根據(jù)外泌體表面的特定蛋白結(jié)構(gòu)選擇性地識(shí)別和富集外泌體的方法。具體操作步驟如下:
 
    (1) 取血液樣品,離心去除細(xì)胞和碎片,獲得血漿;
 
    (2) 在血漿中加入外泌體表面膜蛋白的抗體或親和分子,將外泌體蛋白質(zhì)選擇性富集并固定在試劑上;
 
    (3) 再次離心和洗滌,用PBS緩沖液再次懸浮外泌體以獲取純凈外泌體。
 

    親和法能夠選擇性地識(shí)別目標(biāo)蛋白質(zhì),提高了外泌體提取的純度,但其缺點(diǎn)在于需要特定的抗體或親和劑,所以適用范圍相對(duì)較窄。
 
     綜合比較三種提取血清外泌體的方法,超速離心法最為常用,具有簡(jiǎn)便易行、適用于大規(guī)模制備的優(yōu)點(diǎn)。而大孔徑濾膜法雖然操作簡(jiǎn)便,但存在無(wú)法直接定量檢測(cè)外泌體及低純度的問(wèn)題。

    免疫親和法具有選擇性富集的優(yōu)點(diǎn),但需要特定的抗體或親和劑,適用范圍較小。因此,在選擇合適的提取方法時(shí),需根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行選擇。