外泌體超速離心法提取過程
日期：2023-06-02 11:19:40
外泌體是細(xì)胞釋放到細(xì)胞外的一種小型囊泡，內(nèi)含有多種生物大分子，在許多生物學(xué)領(lǐng)域中都具有重要作用。然而，外泌體的純化和鑒定依然面臨諸多挑戰(zhàn)，因此需要開發(fā)出更優(yōu)質(zhì)的提取方法。其中，超速離心法是一種常用的外泌體提取方法。
1、培養(yǎng)細(xì)胞
首先，需要在含有適當(dāng)培養(yǎng)基、血清的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)細(xì)胞。常用的細(xì)胞包括肝細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血小板等。在細(xì)胞密度達(dá)到一定值后，收集培養(yǎng)液進(jìn)行離心。
2、離心
將培養(yǎng)液離心，去除大量的細(xì)胞碎片和細(xì)胞核等雜質(zhì)。離心的條件通常為300g×10min，使其沉淀。此時，上清液中含有大部分的外泌體。
3、再離心
將步驟2的上清液再次離心，離心的條件通常為2000g×10min。此時，可以觀察到沉淀中含有較多的外泌體，但仍然存在一定的雜質(zhì)。
4、洗滌
為了去除雜質(zhì)，需要對第3步的沉淀進(jìn)行洗滌。在無菌條件下，加入PBS緩沖液（含1%乙二醇），以適當(dāng)速度攪拌渦流。洗滌過程通常進(jìn)行3-5次，每次離心的條件為2000g×10min。
5、超速離心
進(jìn)行超速離心，以進(jìn)一步純化外泌體。將洗滌后的沉淀再次離心，離心的條件通常為12000g×30min，或者在超高速離心機(jī)中進(jìn)行離心，離心的條件為110000g×70min。此時，干凈的外泌體已經(jīng)濃縮在沉淀中，可以直接收集并用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
超速離心法是一種簡單直接、高效快捷、生物活性好的外泌體提取方法。在使用這個方法的時候需要注意消毒、避免污染等問題，以保證外泌體的質(zhì)量和純度。
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