組織外泌體提取方法有哪些？
日期：2023-06-08 13:40:14
組織外泌體（Extracellular vesicles, EVs）通過分泌到細(xì)胞外部分泌物中傳遞信息。EVs在細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和物質(zhì)傳遞等方面起到了重要作用。而提取高純度、活性的EVs是進(jìn)行研究的前提和基礎(chǔ)。本文將介紹常見的組織外泌體提取方法，并對其優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行比較。
一、超速離心法
超速離心法（Ultracentrifugation, UC）是目前最常用的提取組織外泌體的方法之一，其基本原理是通過離心分離樣品中不同密度的成分。UC的操作步驟包括：第一步低速離心去除細(xì)胞碎片和細(xì)胞核，第二步高速離心去除大小不同的顆粒（如微粒子），第三步超高速離心沉淀組織外泌體。UC具有高效、簡單等優(yōu)點(diǎn)，但存在離心時(shí)間長、分離效果不穩(wěn)定等缺點(diǎn)。
二、密度梯度離心法
與UC類似，密度梯度離心法（Density gradient centrifugation, DGC）是一種通過離心分離出不同密度的成分的方法。與UC不同的是，DGC是通過在管內(nèi)構(gòu)建含有不同濃度的離子溶液梯度，利用泳動(dòng)作用將泡膜小囊泡分離出來。DGC具有純度高、分選精度好等優(yōu)點(diǎn)，但存在耗時(shí)長、操作復(fù)雜等缺點(diǎn)。
三、尺寸篩選法
尺寸篩選法（Size-exclusion chromatography, SEC）是一種利用柱填料篩分樣品的方法，在制備EVs時(shí)可選擇膜孔大小與EVs顆粒大小相對應(yīng)的填料進(jìn)行分離。SEC的優(yōu)點(diǎn)在于可以得到更為純凈的EVs，同時(shí)保留更多EVs的生物活性，但其缺點(diǎn)在于對前處理和柱填料的選擇要求高，通量也相對較低。
四、超濾法
超濾法（Ultrafiltration, UF）是利用中空纖維膜或多孔膜濾除EVs，細(xì)胞碎片和其他大分子雜質(zhì)。相比于其它方法，UF操作簡便、速度快，同時(shí)可以得到更為純凈的EVs，并且可以組合應(yīng)用其他方法實(shí)現(xiàn)不同級(jí)別的分離和純化。但其缺點(diǎn)在于需要過濾器的選擇和膜孔大小的控制，同時(shí)不能分離不同密度的EVs。
以上四種方法都是常用的提取組織外泌體的方法，每種方法都有其優(yōu)缺點(diǎn)，在實(shí)際應(yīng)用中需要選擇合適的方法。另外，隨著技術(shù)的發(fā)展和研究深入，不斷有新的EVs提取和純化技術(shù)被開發(fā)和改進(jìn)，如抗體親和法、電泳法等，這些技術(shù)將進(jìn)一步擴(kuò)展EVs的應(yīng)用范圍和研究內(nèi)容。
