merip-qPCR實(shí)驗(yàn)原理步驟
日期：2023-08-15 10:35:43
merip-qPCR（MeRIP-qPCR）是一種結(jié)合甲基化RNA免疫沉淀（MeRIP）和實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）的方法，用于檢測(cè)RNA上的甲基化修飾。
MeRIP實(shí)驗(yàn)的步驟如下：
? 1、甲基化RNA免疫沉淀（MeRIP）：首先，通過(guò)使用特異性的抗體（如MeRIP抗體）將甲基化的RNA以及其周圍的非甲基化RNA選擇性地免疫沉淀。這個(gè)步驟可以通過(guò)將細(xì)胞或組織的RNA與抗體一起孵育，然后利用表面修飾的磁珠或蛋白A/G瓊脂糖顆粒來(lái)捕獲和富集甲基化的RNA。
? 2、甲基化RNA的洗滌和釋放：沉淀后，對(duì)甲基化RNA進(jìn)行洗滌，以去除非特異性結(jié)合的RNA分子。然后，通過(guò)使用高鹽緩沖液或其他適當(dāng)?shù)姆椒▉?lái)釋放沉淀的甲基化RNA，并將其轉(zhuǎn)移到新的反應(yīng)管中。
? 3、反轉(zhuǎn)錄和合成cDNA：通過(guò)使用逆轉(zhuǎn)錄酶，將被釋放的甲基化RNA轉(zhuǎn)錄成相應(yīng)的互補(bǔ)DNA（cDNA）。反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中需要引入逆轉(zhuǎn)錄引物（與RNA相互補(bǔ)）以合成cDNA。
? 4、實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）：將合成的cDNA作為模板，利用特異性引物和熒光探針進(jìn)行實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)。獲取反應(yīng)的熒光信號(hào)，并根據(jù)熒光信號(hào)的變化來(lái)定量甲基化RNA的豐度。
? 通過(guò)MeRIP-qPCR實(shí)驗(yàn)，可以定量檢測(cè)RNA分子上的甲基化修飾，為進(jìn)一步研究RNA甲基化調(diào)控的生物學(xué)功能提供重要的信息。
