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外泌體超速離心法提取過程

日期:2023-09-27 15:27:00


    外泌體超速離心法是常用的外泌體提取方法。以下是外泌體超速離心法的提取過程:
 
    樣本收集:收集待處理的生物樣本,如細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血漿、尿液等含有外泌體的樣本。
 
    前處理:將收集到的樣本進(jìn)行前處理,包括去除細(xì)胞碎片、細(xì)胞核和大顆粒物質(zhì)。這可以通過低速離心(如300g)獲取上清液。
 
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    超速離心:將上清液轉(zhuǎn)移到聚乙烯醇/葡聚糖等密度梯度溶液中,并進(jìn)行超速離心。超速離心的條件可以根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)設(shè)定,通常在1萬到10萬g之間離心30分鐘至2小時(shí)。
 
    液體收集:將超速離心后的上清液小心地收集至離心管底部。此時(shí),外泌體富集在密度梯度溶液的底部層。
 
    洗滌:使用緩沖溶液PBS對外泌體進(jìn)行一至多次洗滌步驟,以去除梯度溶液殘留和雜質(zhì)。
 
    再次離心:將洗滌后的外泌體懸浮液進(jìn)行再次超速離心,以沉淀外泌體。
 
    上清液去除:去除上清液,將外泌體沉淀物留在離心管底部。
 
    重懸:將外泌體沉淀物用適當(dāng)?shù)木彌_液重新懸浮,如PBS。
 
    儲(chǔ)存或進(jìn)一步分析:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,可以將提取得到的外泌體樣品進(jìn)行儲(chǔ)存或進(jìn)行進(jìn)一步的分析和實(shí)驗(yàn)。
 
    外泌體提取的具體條件和步驟可能因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)的不同而有所差異。因此,在具體操作時(shí),建議參考相關(guān)研究文獻(xiàn)或?qū)I(yè)實(shí)驗(yàn)方法來進(jìn)行操作。