怎么優(yōu)化大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的蛋白產(chǎn)量？
日期：2025-05-20 11:05:03
1、載體與宿主菌匹配
選擇強(qiáng)啟動(dòng)子（如 T7、λPR 啟動(dòng)子）和合適的核糖體結(jié)合位點(diǎn)（RBS）增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄和翻譯效率；
根據(jù)蛋白特性選擇宿主菌：
BL21（DE3）：適合誘導(dǎo)型表達(dá)，蛋白酶活性低，常用于重組蛋白生產(chǎn)；
Origami 系列：含硫氧還蛋白還原酶（trxB）和谷胱甘肽還原酶（gor）突變，促進(jìn)胞內(nèi)二硫鍵形成，適合分泌型蛋白表達(dá)。
2、培養(yǎng)條件優(yōu)化
溫度：低溫（18-25℃）可減少包涵體形成，促進(jìn)可溶性蛋白表達(dá)；
誘導(dǎo)劑濃度與時(shí)機(jī)：低濃度 IPTG（如 0.1 mM）或乳糖自誘導(dǎo)可避免代謝負(fù)擔(dān)；對(duì)數(shù)中期（OD???=0.6-0.8）誘導(dǎo)最佳；
培養(yǎng)基成分：使用富含氨基酸的培養(yǎng)基（如 TB、2×YT）或補(bǔ)加葡萄糖、甘油等碳源，維持菌體生長(zhǎng)和蛋白合成。
3、融合標(biāo)簽與純化策略
添加親和標(biāo)簽（如 His?、GST、MBP）提高蛋白可溶性并簡(jiǎn)化純化流程；
使用蛋白酶（如 TEV、Factor Xa）切除標(biāo)簽，恢復(fù)蛋白天然活性。
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