gapdh作為WB內參大小需要多少濃度的分離膠?
日期:2023-06-12 14:13:21
GAPDH(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)內源性蛋白質,在Western Blot(簡稱WB)實驗中常被用作內參,以對待測蛋白的表達量進行校正。而WB實驗中的分離膠濃度,通常由蛋白質的分子量和研究需要決定。
目前常用的SDS-PAGE體系,根據(jù)不同的要求一般有兩種類型的分離膠:T分離膠和U分離膠。其中,T分離膠適用于分子量在10-250 kDa之間的蛋白質,而U分離膠適用于分子量在5-100 kDa之間的蛋白質。
針對您的問題,GAPDH的分子量約為36 kDa,因此在使用T分離膠的情況下,通常推薦將分離膠的濃度設定在10%-12、5%之間,以保證GAPDH能夠充分地被分離并且呈現(xiàn)出較好的帶狀。而在使用U分離膠的情況下,通常建議將分離膠的濃度設定在12、5%以上,以確保GAPDH的帶能夠顯著地與其它蛋白質的帶進行區(qū)分。
以上的建議僅僅是一個參考值,實際的分離膠濃度還需要根據(jù)具體的實驗目的和試驗數(shù)據(jù)進行調整。此外,在WB實驗中使用內參時,一定要注意它的表達水平和是否穩(wěn)定,以避免誤差的產生。
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