gst標(biāo)簽蛋白純化原理
日期：2023-07-27 14:39:58
GST標(biāo)簽是一種常用的蛋白純化標(biāo)簽，它利用谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）與谷胱甘肽（glutathione）之間的高親和力來純化目標(biāo)蛋白。以下是GST標(biāo)簽蛋白純化的原理：
構(gòu)建融合蛋白：在目標(biāo)蛋白的N端或C端連接GST標(biāo)簽，構(gòu)建GST-目標(biāo)蛋白融合蛋白。
細(xì)胞表達(dá)：將GST-目標(biāo)蛋白融合基因?qū)胨拗骷?xì)胞，使其表達(dá)GST-目標(biāo)蛋白融合蛋白。
細(xì)胞裂解：對(duì)表達(dá)的細(xì)胞進(jìn)行裂解，釋放細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。
親和層析：使用谷胱甘肽瓊脂糖珠（如Glutathione Sepharose）或磁珠等含有谷胱甘肽結(jié)合物的柱子，將裂解的細(xì)胞提取物加載到柱子中。由于GST與谷胱甘肽的高親和力，GST-目標(biāo)蛋白融合蛋白會(huì)與柱子上的谷胱甘肽結(jié)合物結(jié)合。
洗脫：通過洗滌步驟去除非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，保留結(jié)合的GST-目標(biāo)蛋白融合蛋白。
解離：通過加入過量的還原劑、酸或其他解離條件，將GST-目標(biāo)蛋白融合蛋白與谷胱甘肽結(jié)合物解離。
蛋白收集：收集解離后的目標(biāo)蛋白，即純化得到的目標(biāo)蛋白。
GST標(biāo)簽蛋白純化原理的關(guān)鍵在于利用GST與谷胱甘肽之間的高親和力。谷胱甘肽作為固相材料，能夠選擇性地捕獲含有GST標(biāo)簽的融合蛋白，而非融合蛋白等其他細(xì)胞組分。通過洗脫和解離步驟，目標(biāo)蛋白可以從柱子上被分離和純化出來。這種方法簡(jiǎn)單、高效，特別適用于大規(guī)模蛋白純化和高表達(dá)的目標(biāo)蛋白。
