AKTA蛋白純化步驟
日期：2023-07-28 13:35:20
AKTA是常用的蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)，廣泛應(yīng)用于生物分子的純化和制備。下面是一般使用AKTA系統(tǒng)進行蛋白純化的步驟：
準(zhǔn)備工作：
將需要純化的蛋白樣品預(yù)處理，如細胞破碎、超速離心等，以獲得目標(biāo)蛋白的提取物。
準(zhǔn)備好所需的純化介質(zhì)和緩沖溶液：根據(jù)目標(biāo)蛋白的性質(zhì)選擇合適的親和層析介質(zhì)、離子交換層析介質(zhì)或其他純化介質(zhì)，并配置相應(yīng)的緩沖溶液。
設(shè)定AKTA系統(tǒng)參數(shù)：
將純化介質(zhì)裝填到柱子中，并將柱子安裝到AKTA系統(tǒng)上。
設(shè)置流速、梯度程序和檢測波長等操作參數(shù)，根據(jù)具體純化方法和目標(biāo)蛋白的特性進行設(shè)定。
樣品加載：
將預(yù)處理好的蛋白樣品注入到AKTA系統(tǒng)中的注射器或自動注射器中。
在設(shè)定的流速下，將樣品通過柱子，使樣品中的目標(biāo)蛋白與純化介質(zhì)發(fā)生特異性結(jié)合。
柱洗脫：
根據(jù)純化介質(zhì)的特性和純化策略，使用合適的洗脫緩沖溶液沖洗柱子，去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì)。
注入高濃度洗脫緩沖溶液，使目標(biāo)蛋白與純化介質(zhì)解離。
方案收集：
設(shè)置合適的方案收集方式，可以按分數(shù)收集純化的樣品。
監(jiān)控波長進行實時檢測并根據(jù)信號強度進行分數(shù)收集。
評估純化后的樣品：
通過SDS-PAGE、Western blot等方法對純化后的樣品進行分析，評估純化效果和目標(biāo)蛋白的純度。
具體的步驟可能會因純化介質(zhì)、目標(biāo)蛋白的性質(zhì)和純化策略的不同而有所變化。因此，在進行蛋白純化時，建議參考相關(guān)的文獻和廠家提供的操作手冊，并根據(jù)實際情況進行優(yōu)化調(diào)整。
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