gst標(biāo)簽蛋白誘導(dǎo)條件

日期：2023-08-10 15:28:03

GST標(biāo)簽是一種常用的蛋白表達(dá)和純化工具，它由谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（glutathione S-transferase, GST）序列與目標(biāo)蛋白序列相連構(gòu)成。以下是一般的GST標(biāo)簽蛋白誘導(dǎo)條件：

選擇合適的表達(dá)系統(tǒng)：GST標(biāo)簽蛋白通常在大腸桿菌（Escherichia coli）中表達(dá)?？筛鶕?jù)需要選擇適合的表達(dá)系統(tǒng)，如pET系統(tǒng)或pGEX系統(tǒng)等。

構(gòu)建表達(dá)載體：將目標(biāo)蛋白的編碼序列與GST標(biāo)簽序列連接，構(gòu)建表達(dá)載體。確保連接正確且在正確的閱讀框架中。

轉(zhuǎn)化宿主菌：將構(gòu)建好的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到適當(dāng)?shù)拇竽c桿菌宿主菌中，如BL21(DE3)。

預(yù)培養(yǎng)：從凍存細(xì)胞中挑取一個(gè)單克隆菌落，用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)過夜，在37℃、220 rpm的條件下培養(yǎng)。

大規(guī)模培養(yǎng)：將預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞接種到含有適當(dāng)抗生素的培養(yǎng)基中，根據(jù)需要添加誘導(dǎo)劑。常用的誘導(dǎo)劑是異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG）。典型的IPTG誘導(dǎo)濃度為0.1到1 mM。

誘導(dǎo)時(shí)間：GST標(biāo)簽蛋白的誘導(dǎo)時(shí)間因具體實(shí)驗(yàn)而異，一般為4到6小時(shí)?？梢酝ㄟ^監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基的細(xì)胞密度和表達(dá)蛋白的預(yù)實(shí)驗(yàn)來確定最佳的誘導(dǎo)時(shí)間。

細(xì)胞收獲：在適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)時(shí)間后，收集細(xì)胞通過離心等方法獲得細(xì)胞沉淀。

蛋白提?。菏褂眠m當(dāng)?shù)牡鞍滋崛【彌_液裂解細(xì)胞，并通過超聲或凍融等方法充分破碎細(xì)胞。

GST標(biāo)簽蛋白純化：利用GST標(biāo)簽與谷胱甘肽瓊脂糖（glutathione agarose）或GST親和樹脂結(jié)合，純化目標(biāo)蛋白?？梢允褂孟疵摼彌_液洗脫純化的GST標(biāo)簽蛋白。

在進(jìn)行GST標(biāo)簽蛋白表達(dá)和純化實(shí)驗(yàn)時(shí)，需合理優(yōu)化表達(dá)條件和純化步驟，以確保高質(zhì)量的目標(biāo)蛋白產(chǎn)量和純度。