蛋白質(zhì)定量的三種方法及原理

日期：2023-09-14 15:20:00

蛋白質(zhì)定量是生物學(xué)研究中的重要任務(wù)，以下是三種常用的蛋白質(zhì)定量方法及其原理：

1、Bradford法：

原理：Bradford法是基于蛋白質(zhì)和染料之間的相互作用原理。在酸性條件下，蛋白質(zhì)與吸附染料（例如Coomassie Brilliant Blue G-250）形成復(fù)合物，導(dǎo)致染料溶液的吸光度變化。該吸光度變化與蛋白質(zhì)濃度呈線性關(guān)系。

應(yīng)用：Bradford法廣泛應(yīng)用于常規(guī)蛋白質(zhì)測定，適用于大多數(shù)蛋白質(zhì)樣品。

2、BCA法（雙硫聯(lián)苯胺法）：

原理：BCA法也是一種基于染料與蛋白質(zhì)之間的相互作用原理的方法。在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的蛋白質(zhì)結(jié)合能力將還原劑（如四氯化鈷或四氯化銅）還原為二價離子，并與BCA試劑中存在的堿式溴酮酸鹽反應(yīng)生成可見光吸收的紫紅色產(chǎn)物。產(chǎn)物的吸光度與蛋白質(zhì)濃度成正比。

應(yīng)用：BCA法對于蛋白質(zhì)濃度較低的樣品敏感，廣泛應(yīng)用于常規(guī)蛋白質(zhì)測定，適用于多種蛋白質(zhì)樣品。

3、Lowry法：

原理：Lowry法是一種經(jīng)典的蛋白質(zhì)定量方法。該方法利用蛋白質(zhì)在酸性環(huán)境中與染料（如銅離子和堿式碳酸銅）形成絡(luò)合物，并在堿性條件下發(fā)生還原反應(yīng)，產(chǎn)生可見吸收光譜。該光譜與蛋白質(zhì)濃度呈線性關(guān)系。

應(yīng)用：Lowry法在蛋白質(zhì)定量中具有較高的靈敏度和準確性，適用于大多數(shù)蛋白質(zhì)樣品。

不同蛋白質(zhì)定量方法的選擇應(yīng)根據(jù)實驗需求、樣品類型和儀器設(shè)備等因素綜合考慮。另外還有其他一些常用的蛋白質(zhì)定量方法，如生物素-親和法（biotin-streptavidin method）、免疫印記法（immunoassay）等，可以根據(jù)具體情況選擇合適的方法進行蛋白質(zhì)定量。