如何驗證fc受體信號通路激活

日期：2023-04-23 15:21:42

Fc受體（FcR）是廣泛存在于免疫細胞表面的一類受體，可以識別和結合抗體Fc段。Fc受體激活后，可通過一系列信號傳導通路調控細胞的生理功能。在研究中，為了證明Fc受體信號通路的激活，通常需要進行下面的一些試驗。

Western blotting分析
Western blotting能夠檢測到Fc受體激活后的下游蛋白質的表達水平。當Fc受體激活后，下游信號通路會被激活，并導致一系列蛋白質的表達變化。將免疫細胞暴露于Fc受體激動劑中，然后使用Western blotting技術檢測已知的信號通路蛋白的表達變化，如Lyn、Syk、Akt等。Western blotting還可以檢測蛋白質的磷酸化狀態(tài)，利用磷酸化狀態(tài)的變化進一步證實Fc受體信號通路的激活。

流式細胞術
流式細胞術通常用于檢測免疫細胞表面Fc受體的表達水平。通過使用攜帶熒光標記的抗體，細胞表面Fc受體可以被檢測到。在Fc受體激動劑處理后，使用流式細胞術同時檢測下游信號通路的蛋白質表達水平（如CD69、CD25等）也是一種證實Fc受體信號通路激活的方法。

實時定量PCR分析
實時定量PCR可以用來檢測Fc受體激活后的mRNA表達水平。首先，提取免疫細胞總RNA，然后合成cDNA。之后，利用特異性引物和TaqMan探針來擴增感興趣的基因，并通過實時熒光鑒定獲得擴增產(chǎn)物的數(shù)量。這些數(shù)據(jù)可以進一步用于比較組間樣本Fc受體信號通路激活的差異。

磷酸化技術
蛋白質磷酸化是Fc受體信號通路激活的一個重要步驟。因此，對于Fc受體的磷酸化狀態(tài)進行檢測，可以間接證實Fc受體信號通路的激活。主要有兩種技術可用于磷酸化檢測：磷酸化Western blotting和磷酸化抗體陣列。磷酸化抗體陣列可以同時檢測上千種蛋白質的磷酸化狀態(tài)，是一種高通量的檢測方法。

通過Western blotting，流式細胞術，實時定量PCR和磷酸化技術等方法，可以檢測Fc受體激活后下游蛋白質、mRNA表達及磷酸化狀態(tài)的變化情況，進而間接證實Fc受體信號通路的激活。