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外泌體提取工藝步驟

日期:2023-04-03 15:46:10

外泌體提取的一般工藝流程:
細(xì)胞培養(yǎng):首先需要選擇外泌體分泌比較豐富的細(xì)胞,如HEK293、THP-1等,進(jìn)行培養(yǎng)。
收集細(xì)胞上清:收集細(xì)胞培養(yǎng)上清,可以通過(guò)離心或?yàn)V過(guò)等方式去除細(xì)胞碎片和細(xì)胞核等雜質(zhì)。
初步離心:對(duì)細(xì)胞上清進(jìn)行初步離心,去除較大的微粒和細(xì)胞碎片等,一般采用低速離心(如3000×g,10分鐘)。
超速離心:對(duì)初步離心后的上清進(jìn)行超速離心,去除較小的微粒和小泡,一般采用高速離心(如10000×g,30分鐘)。
濾過(guò):對(duì)離心后的上清進(jìn)行濾過(guò),去除大分子雜質(zhì),如細(xì)胞核等。
再次超速離心:對(duì)濾過(guò)后的上清進(jìn)行再次超速離心,分離出外泌體,一般采用最高速離心(如100000×g,70分鐘)。
懸浮液洗滌:將分離出的外泌體懸浮于PBS等緩沖液中,進(jìn)行洗滌。
再次超速離心:將洗滌后的外泌體進(jìn)行再次超速離心,去除洗滌緩沖液和雜質(zhì)。
終末懸液:將去除雜質(zhì)的外泌體懸浮于PBS等緩沖液中,形成最終的外泌體提取物。
外泌體提取工藝需要注意去除雜質(zhì)和細(xì)胞碎片等,以保證提取的外泌體純度和活性。同時(shí),外泌體提取也需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行優(yōu)化和調(diào)整。