ELISA試劑盒的樣本收集與前期準(zhǔn)備步驟

日期：2023-05-16 11:50:30

ELISA酶標(biāo)技術(shù)是通過共價化學(xué)結(jié)合將抗原或抗體固定在固相材料上，利用酶標(biāo)記的二抗檢測樣品中特定抗原或抗體的方法。ELISA試劑盒是一種方便快捷的實(shí)驗(yàn)工具，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時，必須仔細(xì)準(zhǔn)備并使用正確的技巧，才能得到可靠的結(jié)果。

下面將介紹ELISA試劑盒的標(biāo)本收集與前期準(zhǔn)備步驟。

樣本收集

1、血清：離心法分離血清，避免紅細(xì)胞等其他成分的干擾。在離心前要先將采血管放置于室溫下不少于30分鐘，使血液處于自然凝集狀態(tài)，利于離心后分離血清。

2、血漿：采用抗凝劑離心分離出血漿。血漿可用肝素、EDTA、檸檬酸鈉等抗凝劑穩(wěn)定，并有利于防止凝塊的形成。

3、尿、唾液、汗液等分泌物：采集時要注意不要將其他物質(zhì)加入樣品中，以免影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

4、細(xì)胞培養(yǎng)上清液：細(xì)胞培養(yǎng)上清液可用于檢測蛋白質(zhì)或抗體的表達(dá)和分泌情況。

5、其他標(biāo)本：如組織液、腦脊液等，采集前應(yīng)仔細(xì)查看試劑盒說明書，了解樣品類型、收集方法和儲存條件等要求。

樣本前處理

1、離心：除尿液、唾液等外，所有樣本都要進(jìn)行離心分離出液體，避免顆粒和污染物對結(jié)果產(chǎn)生影響。

2、稀釋：如樣品濃度過高，需將其稀釋至試劑盒檢測范圍內(nèi)，否則會影響分析結(jié)果。

3、加熱：如血清、血漿等樣品，需要用65℃水浴加熱30分鐘，使其凝集蛋白變性，防止干擾因子的影響。

樣品處理

樣品處理是ELISA實(shí)驗(yàn)的一個重要步驟。在樣品處理中，我們需要按照試劑盒說明書的要求進(jìn)行操作，包括以下步驟：

1、涂覆：將樣品加入ELISA板中，與固定在板上的特定抗體或抗原結(jié)合。涂覆前要先準(zhǔn)備好試劑盒中的稀釋緩沖液、洗滌緩沖液等。

2、阻滯：用阻滯緩沖液阻止樣品非特異性吸附NSB。

3、洗滌：利用洗滌緩沖液去除未結(jié)合的成分和NSB，減少干擾因子的影響。

4、檢測：樣品與檢測抗體結(jié)合后，加入酶標(biāo)記的輔助抗體，形成抗原、一級抗體、二級抗體的復(fù)合體，經(jīng)洗滌后加入底物，使酶催化底物變色或發(fā)光。

結(jié)果分析

根據(jù)elisa試劑盒說明書的要求，對ELISA結(jié)果進(jìn)行分析。如有質(zhì)控樣品，可以通過質(zhì)控樣品的結(jié)果，評估實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。按照試劑盒說明書的要求，記錄實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)數(shù)據(jù)，便于后續(xù)結(jié)果分析和討論。

ELISA試劑盒雖然操作簡單，但缺乏認(rèn)真仔細(xì)的樣品收集和前期準(zhǔn)備步驟，就無法得到準(zhǔn)確可靠的結(jié)果。因此，在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)時要注意仔細(xì)閱讀說明書、規(guī)范操作、嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，才能取得令人滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。