酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒原理和作用
日期:2023-07-03 16:12:58
酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是常用的免疫學(xué)檢測方法,用于檢測特定抗原或抗體的存在和濃度。ELISA試劑盒是用于執(zhí)行ELISA實(shí)驗(yàn)的一套化學(xué)試劑的組合。
ELISA試劑盒的原理是基于特異性抗原-抗體反應(yīng)和酶的催化作用。一般來說,ELISA試劑盒包括以下幾個(gè)步驟:
固定:將待測樣品中的目標(biāo)分子(抗原或抗體)固定在試驗(yàn)板的表面上。通常使用多孔板(如96孔板)作為固相。
捕獲:將與目標(biāo)分子特異性反應(yīng)的捕獲抗體加入到孔中,與固定的目標(biāo)分子形成抗原-抗體復(fù)合物。
檢測:加入與目標(biāo)分子特異性結(jié)合的檢測抗體,形成二抗夾心復(fù)合物。檢測抗體上連接有特定的酶(如辣根過氧化物酶,HRP)。
反應(yīng):加入底物(如TMB),酶催化底物發(fā)生變色反應(yīng),產(chǎn)生可檢測的信號。酶的活性與目標(biāo)分子的濃度成正比。
檢測:利用吸光度計(jì)或熒光計(jì)等儀器,測量反應(yīng)產(chǎn)物的光吸收或熒光強(qiáng)度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線或參考樣品的信號值,可以確定待測樣品中目標(biāo)分子的濃度。
ELISA試劑盒的作用是通過特異性的抗原-抗體反應(yīng),檢測和定量目標(biāo)分子(抗原或抗體)的存在。ELISA廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中,例如檢測感染性疾病、腫瘤標(biāo)志物、激素水平等。
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