elisa實(shí)驗(yàn)原理及步驟

日期：2023-07-17 16:31:19

ELISA免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)生物樣品中特定分子（如抗原或抗體）的存在和濃度。下面是ELISA實(shí)驗(yàn)的基本原理和步驟：

ELISA實(shí)驗(yàn)原理：

具體來(lái)說(shuō)，ELISA利用抗原與抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。通常，抗原會(huì)被吸附在固相載體上，如微孔板表面。

在檢測(cè)樣品中，如果包含與抗原相對(duì)應(yīng)的抗體，它們會(huì)與固定在載體上的抗原發(fā)生結(jié)合。

隨后，通過(guò)添加輔助抗體（通常是與酶結(jié)合的抗體），與已結(jié)合的抗體結(jié)合形成復(fù)合物。

最后，通過(guò)添加酶底物，酶會(huì)催化底物的反應(yīng)產(chǎn)生可測(cè)量的信號(hào)，如顏色變化。

ELISA實(shí)驗(yàn)步驟：

準(zhǔn)備樣品：收集需要檢測(cè)的樣品，如血清、細(xì)胞上清液等，并進(jìn)行必要的預(yù)處理，如稀釋或加入試劑。

板涂抗原：將具有已知抗原性的溶液加入到微孔板中，使其吸附在孔底。

阻斷：通過(guò)添加適當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)（如牛血清蛋白、BSA）來(lái)阻斷未被吸附的孔位，減少非特異性結(jié)合。

加入樣品和對(duì)照：將待測(cè)樣品和已知濃度的對(duì)照樣品加入不同的孔中，通常進(jìn)行多個(gè)重復(fù)。

孵育：將板子封閉，并在適當(dāng)?shù)臈l件下（如溫度和時(shí)間）使抗原與樣品中的抗體發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。

洗滌：將孔中的液體廢棄，然后用緩沖液洗滌孔位，以去除未結(jié)合的物質(zhì)。

添加檢測(cè)抗體：加入與特定抗原或抗體結(jié)合的酶標(biāo)記抗體，并充分孵育。

再次洗滌：洗滌掉未結(jié)合的酶標(biāo)記抗體。

加入底物：加入一個(gè)與酶標(biāo)記相關(guān)的底物，例如TMB（3,3',5,5'-四甲基苯基二乙基苯并噻唑啉-2,2'-聯(lián)苯胺）。

反應(yīng)停止：通過(guò)加入適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)停止劑（如硫酸等），停止底物的反應(yīng)。

讀取結(jié)果：使用光度計(jì)等儀器，測(cè)量底物反應(yīng)產(chǎn)生的信號(hào)的強(qiáng)度，并將其與標(biāo)準(zhǔn)曲線或?qū)φ諛悠愤M(jìn)行比較，以確定待測(cè)樣品中的目標(biāo)分子的濃度。

這些步驟是一般ELISA實(shí)驗(yàn)的基本流程，具體步驟可能會(huì)因不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、抗?抗體類型和試劑盒品牌而有所差異。在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)之前，建議參考相關(guān)實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)、文獻(xiàn)以及試劑的說(shuō)明書(shū)，以確保正確而可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。