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elisa檢測時底物溶液的使用注意事項有哪些?

日期:2025-04-15 10:05:00

    底物溶液應(yīng)在使用前新鮮配制,避免長時間放置。配制底物溶液時要嚴格按照說明書的要求進行,注意試劑的加入順序和比例。底物溶液對光敏感,應(yīng)在避光條件下保存和使用。加入底物溶液后,要注意觀察顯色反應(yīng)的進程,避免顯色過度或不足。當(dāng)達到合適的顯色程度時,應(yīng)及時加入終止液終止反應(yīng)。
 
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ELISA 檢測時底物溶液的使用有以下注意事項:
 
    保存條件:底物溶液通常需要在避光、低溫(一般為 2 - 8℃)的條件下保存。有些底物對光和溫度較為敏感,不適當(dāng)?shù)谋4鏃l件可能導(dǎo)致底物提前分解或變質(zhì),影響檢測結(jié)果的準確性。
 
    現(xiàn)用現(xiàn)配:為了保證底物溶液的有效性和穩(wěn)定性,最好是現(xiàn)用現(xiàn)配。尤其是對于一些含有不穩(wěn)定成分的底物,如含有過氧化氫的底物溶液,放置時間過長可能會使過氧化氫分解,降低底物的活性。
 
    平衡至室溫:在使用前,應(yīng)將底物溶液從冰箱中取出,放置在室溫下平衡一段時間,一般為 15 - 30 分鐘。這樣可以避免因底物溶液與反應(yīng)體系的溫度差異而影響反應(yīng)速率和檢測結(jié)果。
 
    避免污染:使用干凈的移液器和容器來吸取和分裝底物溶液,避免底物溶液受到污染。同時,不要將用過的移液器頭再次插入底物溶液中,防止交叉污染。
 
    加入順序和時間:在 ELISA 檢測中,底物溶液通常是在加入酶標抗體并孵育洗滌后加入。要注意按照實驗步驟的要求準確加入底物溶液,并嚴格控制加入后的反應(yīng)時間。不同的底物反應(yīng)時間可能有所不同,一般在 5 - 30 分鐘之間,具體時間需要根據(jù)實驗方案和底物的特性來確定。
 
    反應(yīng)終止:當(dāng)?shù)孜锓磻?yīng)達到預(yù)期的時間后,需要及時加入終止液來終止反應(yīng)。終止液的加入量和加入方式也需要準確操作,以確保反應(yīng)能夠完全終止,避免因反應(yīng)過度或終止不完全而影響檢測結(jié)果的準確性。
 
    觀察和記錄:在底物反應(yīng)過程中,要注意觀察反應(yīng)孔內(nèi)的顏色變化。可以使用酶標儀在特定波長下讀取吸光度值,以定量分析檢測結(jié)果。同時,也要注意觀察顏色變化是否均勻、有無異常顏色出現(xiàn)等情況,如有異常,應(yīng)及時分析原因并采取相應(yīng)的措施。
 
    安全防護:一些底物溶液可能具有一定的毒性或腐蝕性,如含有鄰苯二胺(OPD)的底物溶液具有致癌性,含有四甲基聯(lián)苯胺(TMB)的底物溶液可能對皮膚和眼睛有刺激性。在使用過程中,應(yīng)注意佩戴手套、護目鏡等防護用品,避免接觸皮膚和眼睛。如不慎接觸到,應(yīng)立即用大量清水沖洗,并及時就醫(yī)。