如何分析RNA pulldown實(shí)驗(yàn)的結(jié)果？
日期：2025-05-13 10:39:45
定性分析：通過(guò) Western blot 檢測(cè)，可以確定已知蛋白質(zhì)是否與目標(biāo) RNA 相互作用。將洗脫得到的蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行 SDS - PAGE 電泳，然后轉(zhuǎn)膜，用特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)。如果在相應(yīng)的分子量位置出現(xiàn)條帶，說(shuō)明該蛋白質(zhì)與目標(biāo) RNA 有相互作用。
定量分析：可以通過(guò)灰度值分析等方法對(duì) Western blot 結(jié)果進(jìn)行半定量分析，比較不同條件下蛋白質(zhì)與 RNA 相互作用的強(qiáng)弱。此外，還可以使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等方法進(jìn)行定量分析，若采用帶有熒光標(biāo)記的 RNA 探針，也可通過(guò)熒光強(qiáng)度來(lái)定量分析 RNA - 蛋白質(zhì)的相互作用。
質(zhì)譜分析：對(duì)于篩選未知蛋白質(zhì)與 RNA 的相互作用，質(zhì)譜分析是常用的方法。將洗脫得到的蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行質(zhì)譜分析，通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，可以鑒定出與目標(biāo) RNA 相互作用的蛋白質(zhì)種類和相對(duì)含量。
