1. 什么是ROR1？

ROR1是受體酪氨酸激酶樣孤兒受體（ROR）家族成員之一，屬于I型受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase, RTK)家族。與核受體中的ROR家族不同，ROR是一類膜受體。它們與家族中的原肌球蛋白激酶受體家族(tropomyosin-related kinase, Trk)、骨骼肌特異性酪氧酸激酶樣受體家族(muscle specific knase, MuSK)和神經(jīng)營養(yǎng)因子酯氨酸激酶受體家族(neurotrophic tyrosine kinase receptor, NT-RTK)關(guān)系密切，由于ROR蛋白最初發(fā)現(xiàn)時配體未知，所以被定義為孤兒受體 ^[3]。

ROR家族的另一個成員是ROR2，ROR1與ROR2氨基酸序列的同源性達58%。其中ROR1又含有2種亞型：完整的細(xì)胞膜受體型ROR1以及截短型變異體。截斷型變異體主要分為無胞外結(jié)構(gòu)的膜結(jié)合型ROR1I與只含胞外結(jié)構(gòu)的可溶型ROR1 ^[4]?？扇苄蚏OR1的表達在正常人與腫瘤患者中并無差異，血清中的表達量很低或者檢測不到，且與疾病的進展和嚴(yán)重程度無關(guān)，而完整結(jié)構(gòu)的膜結(jié)合型ROR1在多種腫瘤組織特異性高水平表達 ^[5]。后文中所提到的ROR1都是指完整結(jié)構(gòu)的膜結(jié)合型ROR1。

2. ROR1的結(jié)構(gòu)與功能

ROR1是一種跨膜受體酪氨酸激酶蛋白。ROR1編碼基因共2814bp，位于染色體1p31.3。ROR1膜蛋白由937個氨基酸組成，分子量約105 kDa。ROR1結(jié)構(gòu)在生物種間高度保守，如人與鼠的ROR1氨基酸序列同源性可達97%。如圖1所示，人源ROR1由一個胞外的免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(Ig)、兩個富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域(FZD)、近膜kringle結(jié)構(gòu)域、單次跨膜結(jié)構(gòu)以及一個胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域（TKD）、兩個絲/蘇氨酸富集結(jié)構(gòu)域(S/TRD)和一個脯氨酸富集結(jié)構(gòu)域（PRD）組成 ^[6]。

圖1. The structure of ROR1

*圖片參考文獻發(fā)表在Protein Cell上^[6]。

免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域和半胱氨酸富集結(jié)構(gòu)域與ROR1結(jié)合配體的功能相關(guān)。其中FZD結(jié)構(gòu)域由10個保守的半胱氨酸殘基和5個相應(yīng)的二硫鍵組成。FZD結(jié)構(gòu)還見于平滑肌家族受體（如Smo）、卷曲家族受體（如sFRP）、金屬羧肽酶Z（CPZ）、collagen α1 XVIII和低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白 (LRP)。這些蛋白大都可以結(jié)合Wnt蛋白并參與Wnt通路的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。目前大量研究己經(jīng)證實ROR1也是通過FZD結(jié)合Wnt5a并激活非經(jīng)典Wnt信號通路 ^{[7] [8]}。 Kringle結(jié)構(gòu)域在ROR家族中比較保守，由80個氨基酸組成 ^[9]。其結(jié)構(gòu)特點是含有三個由二硫鍵形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，這三個環(huán)狀結(jié)構(gòu)也參與了ROR受體識別Wnt蛋白的過程。

ROR的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域在生物體高度保守，和Trk、MuSK的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域極其相似。但ROR1蛋白在這段高度保守的區(qū)域內(nèi)存在某些氨基酸序列的改變,提示其胞內(nèi)激酶活性有可能發(fā)生改變。絲/蘇氨酸、脯氨酸富集結(jié)構(gòu)域是由絲/蘇氨酸富集結(jié)構(gòu)域、脯氨酸富集結(jié)構(gòu)域、絲/蘇氨酸富集結(jié)構(gòu)域三個結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成。該區(qū)域存在潛在的磷酸化位點、與下游信號傳導(dǎo)有關(guān)。

3. Wnt5a/ROR1與腫瘤

目前關(guān)于ROR1信號傳導(dǎo)的主流說法是，ROR1可通過介導(dǎo)非經(jīng)典Wnt信號通路（non-canonical Wnt pathways）的信號傳遞，在多種生理過程中發(fā)揮重要作用，其中包括調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂、增殖、遷移、和細(xì)胞趨化，尤其是Wnt5a。Wnt5a是典型的非經(jīng)典Wnt信號通路的激活因子，參與NF-κB亞基p65的磷酸化，激活腫瘤細(xì)胞中NF-κB通路，促進細(xì)胞遷移和侵襲，EMT、癌轉(zhuǎn)移等。接下來，我們具體了解下ROR1是如何通過Wnt5a信號通路激活腫瘤細(xì)胞的。

Wnt5a/ROR1在多種癌癥中的高度表達。作為Wnt5a的受體，ROR1參與激活腫瘤細(xì)胞NF-κB通路。NF-κB通路是炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)控的掌舵者，在多種腫瘤類型中組成性激活。如圖2所示，Wnt5a激活受體ROR1或FZD5，導(dǎo)致Dvl2/3激活和Akt磷酸化。Akt繼而促進IKKα磷酸化激活I(lǐng)KK復(fù)合體，IKK復(fù)合體負(fù)責(zé)IκBα降解和NF-κB亞基p65的磷酸化。磷酸化的p65轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核促進包括Wnt5a在內(nèi)的靶基因轉(zhuǎn)錄表達。Wnt5a的分泌又促進新一輪的自主反饋循環(huán)。自主反饋循環(huán)ROR1/Akt/p65通路的激活會進一步促進促炎因子（如IL-6）和趨化因子（如CCL2）的分泌。

圖2. The diagram of Wnt5a/ROR1 signaling

此外，有多項研究已將ROR1的表達與YAP / TAZ轉(zhuǎn)錄的激活相關(guān)聯(lián)，從而增強腫瘤發(fā)生和化學(xué)耐藥性 ^{[10] [11]}。如圖3所示，Wnt5a與ROR1 / FZD復(fù)合物的結(jié)合，然后通過結(jié)合Gα12/13進一步激活RhoA，從而抑制Lats1/2活性，進而導(dǎo)致YAP / TAZ去磷酸化和核易位。易位到細(xì)胞核里的YAP/TAZ與TEAD結(jié)合后可以誘導(dǎo)涉及細(xì)胞增殖、干細(xì)胞自我更新和腫瘤發(fā)生基因的轉(zhuǎn)錄。增加的YAP/TAZ轉(zhuǎn)錄反過來又可以上調(diào)ROR1表達。

圖3. Crosstalk between Wnt5a-ROR1 signaling and YAP/TAZ pathway

*圖片參考文獻發(fā)表在Cells上^[12]。

4. 靶向ROR1的臨床意義

ROR1靶向藥物的研究正在迅速發(fā)展，高達90多款臨床藥物在研，涉及多種藥物類型和治療機制，主要包括CAR-T細(xì)胞療法、ADC藥物、單克隆抗體等。

CAR-T藥物：以O(shè)NCT - 808和JCAR 024為例，通過基因工程技術(shù)對患者自身的T細(xì)胞進行改造，使其表面表達能夠特異性識別ROR1的嵌合抗原受體（CAR）。當(dāng)回輸?shù)交颊唧w內(nèi)后，這些CAR - T細(xì)胞能夠精準(zhǔn)識別并結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的ROR1，從而激活T細(xì)胞的殺傷功能，直接對腫瘤細(xì)胞發(fā)動免疫攻擊，引發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡。

ADC藥物：如MK - 2140這類ADC藥物，由靶向ROR1的人源化IgG1單克隆抗體、可裂解連接子以及毒性載荷（如單甲基澳瑞他汀E，MMAE）組成。藥物首先通過抗體部分與腫瘤細(xì)胞表面的ROR1特異性結(jié)合，隨后被腫瘤細(xì)胞內(nèi)吞進入細(xì)胞內(nèi)部。在細(xì)胞內(nèi)，連接子在特定酶的作用下發(fā)生裂解，釋放出毒性載荷MMAE，MMAE作為微管蛋白抑制劑，可干擾腫瘤細(xì)胞的微管功能，進而抑制細(xì)胞有絲分裂，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡。

單抗藥物：如ZILO-301（Zilovertamab）是一種人源化單克隆抗體，特異性地靶向ROR1。它能夠精確地識別并結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的ROR1受體。這種結(jié)合可能會觸發(fā)機體自身的免疫反應(yīng)。比如，激活補體系統(tǒng)，誘導(dǎo)補體依賴的細(xì)胞毒性（CDC）作用，或者通過抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC）機制，使免疫細(xì)胞（如自然殺傷細(xì)胞等）識別并殺傷腫瘤細(xì)胞。

這些藥物主要針對ROR1在腫瘤細(xì)胞中的異常高表達，涵蓋了血液系統(tǒng)惡性腫瘤（如白血病、淋巴瘤等）以及實體瘤（如乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌等），有望為不同類型腫瘤患者提供新的治療策略。多家機構(gòu)，包括Oncternal Therapeutics、默沙東、勃林格殷格翰等，正在積極推動這些藥物的研發(fā)，最高階段已處于臨床3期，預(yù)示著ROR1靶向藥物有望在不久的未來上市，為腫瘤精準(zhǔn)治療帶來重大突破，為癌癥患者提供新的治療選擇。

臨床研究表部分展示：

為鼎力協(xié)助各藥企針對ROR1靶點在白血病和腫瘤等藥物方面的研發(fā)工作，CUSABIO推出ROR1活性蛋白產(chǎn)品（Code: CSB-MP020067HU1d7），助力您在ROR1機制方面的研究或其潛在臨床價值的探索。