CRISPR/Cas9是一種強大的基因組編輯工具，表現(xiàn)出有效糾正致病突變的潛力。近期，賓夕法尼亞大學Perelman醫(yī)學院的研究人員，首次開發(fā)出一種雙基因治療方法，將一個CRISPR/Cas9介導的基因打靶系統(tǒng)的關鍵部件，傳遞到小鼠體內來血友病B。這種疾病又稱第九因子缺乏癥，是由一個缺失的或損壞的凝血蛋白導致的。他們的這項研究將提交到12月3日到6日舉行的第五十八屆美國血液學會會議。

大多數(shù)單基因疾病，如血友病，是由于分散在一個特定基因中的不同突變引起的，而不是一個單一的主要突變，所以該團隊需要開發(fā)一個載體，適用于攜帶任何突變的患者。本研究是利用一種通用CRISPR/Cas9基因打靶方法的臨床前概念驗證研究，可以適用于大多數(shù)的特定疾病患者，在這種情況下，是指血友病B。根據(jù)疾病控制和預防中心資料顯示，血友病在活產兒中的一般發(fā)生率是1/5000，在美國大約有20000人患血友病。

本研究第一作者、賓州大學基因治療項目（GTP）的副教授王麗麗（音譯，Lili Wang）博士說“基本上，我們能治愈小鼠。”醫(yī)學教授、GTP主任James M Wilson博士，是這項研究的資深作者。王麗麗博士早年畢業(yè)于復旦大學，1996年博士畢業(yè)于美國羅格斯大學。

為了驗證這種新方法，該研究小組在一種小鼠模型中進行了實驗，這些小鼠的凝血因子IX被敲除。他們用一種雙載體的方法，表達SaCas9基因的載體1，是由一個肝臟特異性啟動子驅動，這就使得基因編輯機器能夠到達肝臟——產生凝血因子IX的自然場所。載體2使得這項研究不同于以前在賓夕法尼亞大學Gene Therapy項目中的CRISPR基因治療研究。載體2含有一段RNA序列，可特異性地靶定小鼠凝血因子IX基因外顯子2 的5端的一個區(qū)域，以及一部分人凝血因子IX cDNA序列，從而使得這種方法更加高效、準確。

該研究小組使用腺相關病毒載體，將這些組件傳遞給小鼠肝細胞。他們開發(fā)的策略是基于CRISPR介導的同源重組，將人類cDA插入小鼠基因組中的因子IX部位。

王博士說：“有針對性的插入，可導致嵌合多動因子IX蛋白在原生小鼠IX因子啟動子的控制下表達。”

向新生和成年敲除小鼠體內注射遞增劑量的兩個載體，超過4個月的時間，表現(xiàn)出穩(wěn)定的因子IX活性，達到或高于正常水平。在載體治療八周后，一小部分新生的和成年基因敲除小鼠接受了部分肝切除手術，并且它們全部成活，而沒有任何并發(fā)癥或干預，并持續(xù)表達相同水平的凝血因子IX。

王博士說：“這項研究提供了令人信服的證據(jù)證明，體內CRISPR/Cas9基因組編輯在血友病B小鼠模型中具有很好的療效。”Wilson實驗室的訪問學者Yang Yang博士，以及來自賓夕法尼亞大學的John White、McMenamin Deirdre和Peter Bell，都是本文共同作者。