免疫電泳實驗
日期:2010-08-13 16:27:19
免疫電泳(immunoelectrophoresis )是將電泳和瓊脂擴散結(jié)合起來,用于分析抗原組成的一種定型方法,具有靈敏快速的優(yōu)點。該實驗可分為如下兩個步驟:
1.電泳 將待檢的可溶性物質(zhì)在瓊脂板上進行電泳分離。由于各種可溶性蛋白分子的大小、質(zhì)量與所帶電荷不同,在電場的作用下,其帶電分子的運動速度具有一定的規(guī)律,因此通過電泳能夠把混合物中的各種不同成分分離開。
2.瓊脂擴散 電泳后在瓊脂槽中加入相應(yīng)抗血清,然后置濕盒內(nèi)進行雙擴散。當(dāng)抗原與抗體相遇且比例適合時,可形成不溶性復(fù)合物,出現(xiàn)特異性沉淀線,根據(jù)沉淀線的數(shù)量和位置,可鑒定分析各種抗原成分及其性質(zhì)。
【材料】
1.抗原:正常人血清;抗體:兔抗人血清。
2.1% 離子瓊脂(用離子強度 0.05 、pH8.6 的巴比妥緩沖液配制)。
3.載玻片、直徑 3mm 的打孔器、2 × 6 × 6 聚苯乙烯塑料條、微量加樣器、電泳儀、吸管等。
【方法】
1.制瓊脂板 載玻片放于水平臺面上,將塑料條放置于玻片中央,吸取 4ml 熱熔的 1% 離子
瓊脂于其上,待凝固后,取出塑料條,即制成瓊脂槽。再按圖 6-2 打孔。
2.加樣 用微量加樣器往孔中加正常人血清。
3.電泳 電壓 4V/cm ,電泳 1.5 小時。
4.瓊脂擴散 在瓊脂槽內(nèi)加入兔抗人血清,使其充滿槽內(nèi),置濕盒內(nèi) 3 7 ℃ 擴散 24 小時,觀察結(jié)果。
【結(jié)果觀察】
在瓊脂槽的兩邊出現(xiàn)相對稱的弧形沉淀線。
【注意事項】
1.電泳擴散后可直接在黑色背景下,用斜射光觀察。
2.電泳時,搭橋應(yīng)完全緊密接觸,以免因電流不均而發(fā)生沉淀線彎曲。
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