基因療法的誕生讓人們激動，但是在過去幾十年里，這一本來被寄予極大厚望的技術(shù)卻發(fā)展頻頻受阻，甚至無疾而終——從1989年起，全世界有超過350次的基因療法試驗(yàn)。在涉及的數(shù)千個病人中，大概只有12個患有某種罕見的免疫系統(tǒng)紊亂的病人，而且都是孩子。然而這種情況近兩年來得到了好轉(zhuǎn)，科學(xué)家們利用基因療法在利伯氏先天性黑內(nèi)障（LCA）和腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良（ALD）等疾病方面取得了重要進(jìn)展。近期來自費(fèi)城兒童醫(yī)院的著名基因療法專家Katherine A. High又在基因療法方法上獲得了突破性進(jìn)展，這無疑是個好消息。

血友病也被稱為皇室病，是一種很典型的遺傳疾病。血友病的發(fā)病原因是由于患者的血液中先天缺乏某種因子，由于血友病目前尚無徹底治愈的方法，人們將基因治療視為根治這一人類遺傳疾病的最終希望。

在最新這篇文章中，Katherine High研究組與Sangamo BioSciences公司的研究人員合作，通過將一個設(shè)計(jì)出的鋅指DNA-結(jié)合區(qū)域融合到一個核酸內(nèi)切酶上，獲得了鋅指核酸酶(ZFN)，從而能利用這些酶在基因組上特定位置誘導(dǎo)雙鏈斷裂，并且在活體中以具有臨床意義的水平刺激基因組編輯，從而誘導(dǎo)高效的基因修正。

由于鋅指核酸酶獨(dú)具在染色體上精確定位的優(yōu)勢，而傳統(tǒng)基因療法卻存在插入誘變（insertional mutagenesis）的風(fēng)險(xiǎn)，可能繞過控制基因的正常生物組分，隨機(jī)地將替代基因傳遞給不利的位置，引發(fā)意外的基因變化，例如白血病。因此利用這一基因組編輯（genome editing）的技術(shù)，基因療法能夠更準(zhǔn)確的定位。

具體而言，研究人員采用B型血友?。╤emophilia B）小鼠模型，利用腺病毒相關(guān)病毒設(shè)計(jì)了兩套基因傳遞載體，一種載體攜帶鋅指核酸酶實(shí)現(xiàn)基因組剪接，另一種攜帶正常的F9基因（F9基因突變引發(fā)B型血友?。＿@樣將鋅指核酸酶送入到患有乙型血友病的活體實(shí)驗(yàn)鼠的肝臟細(xì)胞中，利用第一個載體精確地剪除了細(xì)胞DNA中基因序列上發(fā)生變異的部分，在利用第二個載體將一段正確的基因序列送入細(xì)胞中，細(xì)胞在修復(fù)DNA鏈條的同時也就補(bǔ)貼好了正確的基因序列。

研究顯示轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)鼠的血液可在44秒內(nèi)快速自行凝結(jié)，體內(nèi)相應(yīng)的凝血物質(zhì)可恢復(fù)到正常量的3-7%，經(jīng)過八個月的觀察，其間并無任何毒性反應(yīng)或者副作用發(fā)生。

這是首次在活體動物體內(nèi)實(shí)現(xiàn)基因組編輯技術(shù)，因此具有重要的臨床意義，雖然在過去20年來，基因療法的進(jìn)展只相當(dāng)于5年，但是隨著更多研究的深入開展，相信基因療法未來在臨床中將會越來越成熟。