我國(guó)在加強(qiáng)開展干血斑HIV核酸檢測(cè)
日期:2012-07-03 08:21:35
病毒體的核酸檢測(cè),目前主要依靠PCR技術(shù),隨著PCR的普及,很多病毒都可以通過這種方法檢出,其具有窗口期短,準(zhǔn)確性、特異性高等特點(diǎn)。這種技術(shù)對(duì)樣本的選擇比較多樣化,包括液體血液、干血斑、組織細(xì)胞等均可以作為其樣本。
近年來,國(guó)外不斷有應(yīng)用濾紙片干血斑來檢測(cè)HIV抗體、HIVDNA及RNA的報(bào)道,濾紙片是外周血采集和運(yùn)輸?shù)臉O好載體,外周血滴在濾紙片上可以制成濾紙片干血斑,有很好的生物穩(wěn)定性,并且方便貯存與運(yùn)輸。我國(guó)是一個(gè)地域十分廣闊的大國(guó),各地經(jīng)濟(jì)科技實(shí)力差異較大,為了在我國(guó)開展與推廣這項(xiàng)技術(shù),國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室(NARL)從2004年開始,應(yīng)用濾紙片干血斑檢測(cè)HIV抗體、DNA、基因分型與病毒載量測(cè)定等方面的研究,并于2012年4月舉辦了第一次“全國(guó)濾紙片干血斑HIVDNA檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn)班”。
研究表明血樣的濾紙片干血斑樣本與血漿樣本用EIA法檢測(cè),符合率為100%,相關(guān)性為0.919;兩種樣本經(jīng)WB確認(rèn),條帶完全一致的占總數(shù)的42.85%,其中主要條帶(至少有2條env帶出現(xiàn),或至少1條env和p24帶同時(shí)出現(xiàn))的符合率為100%。其次,應(yīng)用濾紙片干血斑檢測(cè)HIV前病毒DNA,結(jié)果發(fā)現(xiàn), 在重復(fù)2-3次的前提下,濾紙干血斑樣本HIV感染基因診斷敏感度與全血樣本比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。22份兩種陰性樣本特異性均為100%(CI 95.93%100%)。18對(duì)全血和濾紙干血斑樣本HIV基因診斷一致性分析,符合率94%。進(jìn)一步又研究了應(yīng)用濾紙片干血斑樣本用于HIV基因序列測(cè)定和亞型分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),干血斑樣本與全血樣本DNA PCR產(chǎn)物亞型分析一致,氨基酸序列比對(duì)同義和非同義替換比例、位置和類型基本一致。
鑒于上述研究,為保證在實(shí)際操作過程中實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)質(zhì)量,國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室制訂了能力驗(yàn)證計(jì)劃,計(jì)劃包括制備能力驗(yàn)證盤并定期提供開展此工作的各實(shí)驗(yàn)室和對(duì)其檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。目前,全國(guó)已有15個(gè)實(shí)驗(yàn)室參加了技術(shù)培訓(xùn), 包括上海維斯塔(www.i-vst.com)的合作單位上海公共衛(wèi)生中心實(shí)驗(yàn)室在內(nèi)的13個(gè)實(shí)驗(yàn)室參加并完成了國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室的第一次能力驗(yàn)證活動(dòng)。