1．  滅菌物品：

（1）  大濾紙:
（2）  滅菌針筒（含脫脂棉和玻璃釬維）
（3）  脫脂棉
（4）  離心管
（5）  無(wú)菌ddH₂O
（6）  0.6M MgSO₄
（7）  培養(yǎng)基：

A.  等滲培養(yǎng)基（RCM）：麥芽汁 1%，酵母膏 1%，蛋白胨 0.4%，葡萄糖 0.4%，pH自然，用0.6M蔗糖配制。
　　B.  破膜培養(yǎng)基：麥芽汁 1%，酵母膏 1%，蛋白胨 0.4%，葡萄糖 0.4%，pH自然，用水配制。也可以采用含有0.6M蔗糖的PDA作為等滲培養(yǎng)基，破膜培養(yǎng)基不加0.6M蔗糖即可。

（8）  溶壁酶酶液：1.5%，用0.6MMgSO4配制，過(guò)濾除菌；
（9）  培養(yǎng)皿：根據(jù)樣品個(gè)數(shù)

2．  制備方法：

（1）  稱(chēng)取離心管重量并記錄；
（2）  用接種針挑出菌絲，并用滅菌雙蒸水沖洗一次，然后用無(wú)菌的0.6M MgSO4沖洗兩次，用滅菌的濾紙吸干，放入已知重量的離心管，稱(chēng)重并記錄；
（3）  計(jì)算得到菌絲重量，按0.2（g）：1(mL)加入滅菌酶液，震蕩均勻；
（4）  28℃，3~4小時(shí)，搖床震蕩（輕微），酶解，同時(shí)每30min鏡檢觀察原生質(zhì)體數(shù)量；
（5）  滅菌注射器（含脫脂棉和玻璃釬維）過(guò)濾；
（6）  離心：2500rpm,2min
（7）  用0.6M MgSO4洗滌沉淀3次；
（8）  用用0.6M MgSO4定容至最初的加酶量；
（9）  鏡檢計(jì)數(shù)；記錄；
（10）  涂板后再生培養(yǎng)，第7天后每隔1天計(jì)數(shù)一次。