抗體純化的步驟
日期:2023-07-12 14:48:17
抗體純化是分離和純化特定抗體(免疫球蛋白)的過(guò)程。以下是常見(jiàn)的抗體純化步驟:
樣品準(zhǔn)備:收集包含抗體的生物樣品,如血漿、血清或細(xì)胞培養(yǎng)上清液。
預(yù)處理:將樣品進(jìn)行預(yù)處理,去除大顆粒物質(zhì)和雜質(zhì)??梢酝ㄟ^(guò)離心、過(guò)濾或稀釋等方法來(lái)完成。
親和層析:利用親和柱或親和樹脂選擇性地捕獲目標(biāo)抗體。這些親和柱或樹脂通常與特定的抗體結(jié)合蛋白質(zhì)或配體相互作用,從而實(shí)現(xiàn)抗體的富集。
洗脫:使用合適的洗脫緩沖液,洗脫非特異性吸附的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)。同時(shí)保留目標(biāo)抗體在柱上。
濃縮和純化:將洗脫得到的抗體溶液進(jìn)行濃縮,可以使用濃縮裝置或濃縮柱。接著,可以通過(guò)透析或其他方法進(jìn)一步純化抗體,去除剩余的溶質(zhì)和雜質(zhì)。
確認(rèn)純度:使用蛋白質(zhì)分析技術(shù)(如SDS-PAGE、Western blot)驗(yàn)證抗體純度和目標(biāo)抗原的特異性。
抗體純化的具體步驟會(huì)因應(yīng)用和實(shí)驗(yàn)需求的不同而有所差異。在進(jìn)行抗體純化時(shí),還需要遵守相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范,并采取適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量控制措施來(lái)確??贵w的質(zhì)量和純度。
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