小分子抗體制備過程步驟

日期：2023-07-21 17:12:51

小分子抗體，也稱為單域抗體或重鏈抗體，是一種相對較小的抗體結(jié)構(gòu)，通常由單個(gè)抗體變量區(qū)域（VH）組成。以下是制備小分子抗體的一般步驟：

免疫動(dòng)物選擇：選擇適合的免疫動(dòng)物，如小鼠、大鼠或兔子。確保免疫動(dòng)物對目標(biāo)小分子具有良好的免疫應(yīng)答。

免疫原設(shè)計(jì)：合成或純化目標(biāo)小分子作為免疫原?？梢詫⑵渑c蛋白質(zhì)載體偶聯(lián)，以增強(qiáng)免疫原的免疫原性能。

免疫程序：將免疫原注射到免疫動(dòng)物中，按照特定的免疫程序進(jìn)行多次免疫。通常需要注射多個(gè)劑量和間隔時(shí)間的免疫原。

細(xì)胞融合：采集免疫動(dòng)物脾臟等免疫細(xì)胞，并將其與髓瘤細(xì)胞（如骨髓瘤細(xì)胞SP2/0或NS0）進(jìn)行細(xì)胞融合。此過程會(huì)產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，具有抗體產(chǎn)生能力。

雜交瘤篩選：將雜交瘤細(xì)胞分裝到96孔板等細(xì)胞培養(yǎng)板中，以進(jìn)行單克隆雜交瘤細(xì)胞的篩選。通常使用特定的培養(yǎng)基和篩選方法來選擇能夠產(chǎn)生目標(biāo)小分子抗體的雜交瘤細(xì)胞。

克隆擴(kuò)增：從陽性的單克隆雜交瘤細(xì)胞中收集并擴(kuò)增單克隆細(xì)胞，以確保其單一來源并提高抗體的產(chǎn)量。

抗體純化：通過離心、滲透層析、親和層析等技術(shù)純化小分子抗體。此過程可去除其他污染物，提高抗體的純度。

驗(yàn)證和應(yīng)用：對制備的小分子抗體進(jìn)行驗(yàn)證，如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、免疫組織化學(xué)、免疫印跡等方法，以確認(rèn)其特異性和活性。此后，可以將小分子抗體應(yīng)用于各種研究領(lǐng)域，如疾病診斷、治療或?qū)嶒?yàn)室研究等。

制備小分子抗體的具體步驟可能因研究目的、實(shí)驗(yàn)條件和抗體類型而有所不同。上述步驟提供了一般制備小分子抗體的常見流程，但實(shí)際操作時(shí)需根據(jù)具體情況進(jìn)行調(diào)整和優(yōu)化。