昆蟲細(xì)胞桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)步驟

日期：2023-07-12 14:51:37

昆蟲細(xì)胞桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)是一種常用的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，適用于生產(chǎn)大量重組蛋白。以下是昆蟲細(xì)胞桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的基本步驟：

質(zhì)粒構(gòu)建：將目標(biāo)基因的編碼序列克隆到適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)質(zhì)粒中，通常使用能夠在桿狀病毒中復(fù)制的多克隆位點(diǎn)（MCS）。

轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞：將構(gòu)建好的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到昆蟲細(xì)胞中，常用的昆蟲細(xì)胞包括昆蟲細(xì)胞系Sf9和Sf21。轉(zhuǎn)染方法可以是鈣磷共沉淀法、電穿孔法或者化學(xué)試劑轉(zhuǎn)染法。

桿狀病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)座：在轉(zhuǎn)染后，桿狀病毒質(zhì)粒會(huì)通過宿主細(xì)胞的重組作用轉(zhuǎn)座到桿狀病毒基因組中，形成重組桿狀病毒。

重組桿狀病毒擴(kuò)增：使用傳染性的重組桿狀病毒進(jìn)行擴(kuò)增，通過感染更多的昆蟲細(xì)胞來增加重組病毒的產(chǎn)量。

蛋白表達(dá)：將擴(kuò)增得到的重組桿狀病毒注入新的昆蟲細(xì)胞中，讓其感染并表達(dá)目標(biāo)蛋白。通常在感染后的24-72小時(shí)內(nèi)進(jìn)行蛋白表達(dá)。

收集和純化蛋白：收集感染后培養(yǎng)基中的細(xì)胞上清液或裂解細(xì)胞，提取含有目標(biāo)蛋白的細(xì)胞上清液或裂解液。接下來，使用適當(dāng)?shù)姆椒ǎㄈ缬H和層析、離子交換層析、凝膠過濾等）對(duì)蛋白進(jìn)行純化。

昆蟲細(xì)胞桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的步驟可能因具體實(shí)驗(yàn)需求和不同的表達(dá)質(zhì)粒而有所不同。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)遵循相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范，并采取適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量控制措施來確保蛋白的質(zhì)量和純度。