哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)原理流程步驟

日期：2023-07-26 10:31:31

哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)是一種用于在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中產(chǎn)生外源蛋白的方法，具有廣泛的應(yīng)用。以下是哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)的原理：

基因克?。菏紫?，將目標(biāo)基因的DNA序列克隆到適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體上。表達(dá)載體通常包括啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄終止子和選擇標(biāo)記等功能元件。

細(xì)胞培養(yǎng)：將所構(gòu)建的表達(dá)載體導(dǎo)入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，可以選擇多種不同類型的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，如CHO細(xì)胞、HEK293細(xì)胞等。細(xì)胞培養(yǎng)通常在培養(yǎng)皿或發(fā)酵罐中進(jìn)行，提供適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基和條件。

轉(zhuǎn)染和選擇：使用合適的方法將表達(dá)載體導(dǎo)入目標(biāo)細(xì)胞內(nèi)，例如化學(xué)法、電穿孔法、病毒載體轉(zhuǎn)染等。然后，通過(guò)添加適當(dāng)?shù)倪x擇抗生素或其他篩選方法，選擇那些成功表達(dá)了目標(biāo)基因的細(xì)胞。

表達(dá)與分泌：在成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中，表達(dá)載體會(huì)被細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄和翻譯系統(tǒng)識(shí)別并轉(zhuǎn)錄成mRNA，然后翻譯成蛋白質(zhì)。如果表達(dá)載體包含了信號(hào)肽序列，這些蛋白質(zhì)可能會(huì)被定向到細(xì)胞外分泌。

蛋白純化與分析：在目標(biāo)蛋白質(zhì)表達(dá)和分泌后，可以通過(guò)各種蛋白純化技術(shù)（如親和層析、凝膠過(guò)濾、離子交換層析等）對(duì)其進(jìn)行純化。然后可以使用各種方法對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)、定量和結(jié)構(gòu)分析。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄和翻譯機(jī)制，使得外源基因能夠在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄和翻譯成蛋白質(zhì)。通過(guò)選擇合適的細(xì)胞系、合適的表達(dá)載體和適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件，可以實(shí)現(xiàn)高效、穩(wěn)定地表達(dá)外源蛋白，并進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行純化和分析。這為研究蛋白質(zhì)功能、藥物篩選和生物制藥等領(lǐng)域提供了重要工具。