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間接elisa實(shí)驗(yàn)步驟

日期：2023-10-17 15:00:15

間接ELISA是常用的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，用于檢測(cè)特定抗原或抗體的存在。以下是間接ELISA實(shí)驗(yàn)的基本步驟：

抗原涂附：將目標(biāo)抗原溶液加入到微孔板中，使其吸附在孔底表面上，通常需要在4°C下孵育過(guò)夜。

阻斷：倒掉孔中的抗原溶液，然后加入一種阻斷劑（如5%牛血清蛋白/BSA或1%乳清），以防止非特異性結(jié)合。孵育一段時(shí)間（如1小時(shí)）。

抗體孔：倒掉阻斷劑，加入稀釋好的第一抗體溶液（特異性識(shí)別目標(biāo)抗原的抗體），孵育一段時(shí)間。

洗滌：倒掉孔中的第一抗體溶液，用洗滌緩沖液洗滌孔底，以去除未結(jié)合的抗體和其他非特異性成分。可以重復(fù)洗滌2-4次，每次洗滌需要充分。

二抗孔：加入稀釋好的辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的第二抗體溶液，它與第一抗體結(jié)合。孵育一段時(shí)間。

再次洗滌：倒掉孔中的二抗溶液，用洗滌緩沖液洗滌孔底，去除未結(jié)合的二抗和其他非特異性成分。重復(fù)洗滌2-4次。

底物反應(yīng)：加入適當(dāng)?shù)牡孜镆?，其可以通過(guò)HRP催化產(chǎn)生可檢測(cè)的顏色反應(yīng)。孵育一段時(shí)間。

反應(yīng)停止：加入停止液，停止底物的反應(yīng)。這通常會(huì)改變顏色或產(chǎn)生一個(gè)可讀的信號(hào)。

讀取結(jié)果：使用ELISA讀板儀測(cè)量每個(gè)孔的吸光度或熒光強(qiáng)度，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線或?qū)φ諛悠愤M(jìn)行比較，以確定目標(biāo)抗原或抗體的含量。

以上是間接ELISA的基本步驟，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需注意實(shí)驗(yàn)條件、試劑稀釋倍數(shù)、孔板操作、洗滌緩沖液的選擇等因素。具體實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)和條件可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮驮噭┑囊筮M(jìn)行優(yōu)化和調(diào)整。