native page蛋白分子量大于預(yù)期
日期：2023-05-09 15:43:30
Native PAGE是用于分離天然的蛋白質(zhì)復(fù)合物或肽段中的寡聚體和單體的一種電泳技術(shù)。常見(jiàn)問(wèn)題是分離出的蛋白分子量大于預(yù)期。這可能會(huì)由于各種原因造成，下面就分別進(jìn)行介紹和解決方案：
錯(cuò)誤的蛋白分子量估算
首先，需要確認(rèn)所使用的蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)是否準(zhǔn)確。有些廠家提供的Protein Marker不同批次之間可能存在差異，而且市場(chǎng)上存在著很多假冒偽劣的產(chǎn)品。因此，在實(shí)驗(yàn)前需要對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行驗(yàn)證，并且在實(shí)驗(yàn)中盡量使用新鮮的Protein Marker。
蛋白聚合
蛋白聚合也是導(dǎo)致分子量大于預(yù)期的主要因素之一。蛋白聚合是多個(gè)蛋白質(zhì)分子通過(guò)非共價(jià)或共價(jià)鍵連接在一起形成高分子物質(zhì)的過(guò)程。這個(gè)過(guò)程是可逆的，可以通過(guò)加入尿素、硫代磺酸鹽或 β- 硫代乙醇使蛋白質(zhì)復(fù)性并消除聚合。
缺乏還原劑
native page需要使用無(wú)變性劑的緩沖液，因此添加還原劑以減少氧化物的形成對(duì)于避免蛋白聚合也是很必要的。
高溫處理
有些蛋白質(zhì)在高溫下會(huì)失去天然構(gòu)象并形成聚集，從而產(chǎn)生異常條帶。為了避免這種情況的發(fā)生，我們需要注意保持實(shí)驗(yàn)時(shí)的溫度，不要將樣品暴露在高溫環(huán)境中。
native page在實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的問(wèn)題之一是分離出的蛋白分子量大于預(yù)期，這可能由多種因素造成。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要注意標(biāo)準(zhǔn)品的驗(yàn)證、蛋白聚合的消除、還原劑的添加和保持適當(dāng)?shù)臏囟鹊炔僮?，以達(dá)到更穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
