native page蛋白分子量大于預(yù)期
日期：2023-05-09 15:43:30
Native PAGE是用于分離天然的蛋白質(zhì)復(fù)合物或肽段中的寡聚體和單體的一種電泳技術(shù)。常見問題是分離出的蛋白分子量大于預(yù)期。這可能會由于各種原因造成，下面就分別進行介紹和解決方案：
錯誤的蛋白分子量估算
首先，需要確認所使用的蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)是否準(zhǔn)確。有些廠家提供的Protein Marker不同批次之間可能存在差異，而且市場上存在著很多假冒偽劣的產(chǎn)品。因此，在實驗前需要對標(biāo)準(zhǔn)品進行驗證，并且在實驗中盡量使用新鮮的Protein Marker。
蛋白聚合
蛋白聚合也是導(dǎo)致分子量大于預(yù)期的主要因素之一。蛋白聚合是多個蛋白質(zhì)分子通過非共價或共價鍵連接在一起形成高分子物質(zhì)的過程。這個過程是可逆的，可以通過加入尿素、硫代磺酸鹽或 β- 硫代乙醇使蛋白質(zhì)復(fù)性并消除聚合。
缺乏還原劑
native page需要使用無變性劑的緩沖液，因此添加還原劑以減少氧化物的形成對于避免蛋白聚合也是很必要的。
高溫處理
有些蛋白質(zhì)在高溫下會失去天然構(gòu)象并形成聚集，從而產(chǎn)生異常條帶。為了避免這種情況的發(fā)生，我們需要注意保持實驗時的溫度，不要將樣品暴露在高溫環(huán)境中。
native page在實驗中常見的問題之一是分離出的蛋白分子量大于預(yù)期，這可能由多種因素造成。在實驗過程中需要注意標(biāo)準(zhǔn)品的驗證、蛋白聚合的消除、還原劑的添加和保持適當(dāng)?shù)臏囟鹊炔僮鳎赃_到更穩(wěn)定的實驗結(jié)果。
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