大鼠趨化因子受體CXCR4蛋白表達(dá)

日期：2023-05-16 13:17:10

大鼠趨化因子受體CXCR4（chemokine receptor type 4）是一種G蛋白偶聯(lián)受體，廣泛分布于人體各個(gè)組織和器官中。CXCR4與其結(jié)合的配體SDF-1（stromal cell-derived factor 1）在機(jī)體免疫反應(yīng)、組織修復(fù)、造血等生理過程中發(fā)揮著重要作用。因此，研究CXCR4在不同生理和病理狀態(tài)下的表達(dá)情況對深入了解其功能和疾病發(fā)生發(fā)展機(jī)制具有重要意義。

目前，許多研究中都采用Western blotting方法研究CXCR4在不同組織和器官中的表達(dá)情況。以下是一種基于Western blotting的大鼠CXCR4蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)步驟：

1、大鼠組織樣本收集和制備

選擇所需的大鼠組織或細(xì)胞系樣本，并按照需要進(jìn)行處理和分組。將樣本放入離心管中，在-80℃冷凍保存或立即進(jìn)行下一步處理。其中，組織樣本需要先用液氮進(jìn)行粉碎，然后用RIPA細(xì)胞裂解液加苯甲烷/乙酸酐混合物裂解，得到總蛋白。

2、蛋白質(zhì)濃度測定

利用BCA蛋白定量試劑盒或其它蛋白質(zhì)定量方法，測定樣本總蛋白含量。

3、SDS-PAGE電泳分離

將樣品加入含有Laemmli緩沖液的EP管中，進(jìn)行SDS-PAGE電泳。將電泳后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF或Nitrocellulose膜上。

4、一次抗體孵育

將膜置于含有5%牛奶粉的TBST中進(jìn)行封閉。接著，將抗CXCR4一次抗體（如兔抗鼠CXCR4抗體）加入到TBST溶液中，與膜進(jìn)行孵育反應(yīng)，以結(jié)合CXCR4蛋白。

5、二次抗體孵育

去除一次抗體，將HRP標(biāo)記的二次抗體加入到TBST溶液中，與一次抗體結(jié)合并形成信號反應(yīng)。

6、顯色和成像

利用熒光素反應(yīng)劑，通過熒光素發(fā)光檢測儀、X-射線膠片的方法或其它成像設(shè)備對膜進(jìn)行成像。其中熒光素反應(yīng)劑與HRP發(fā)生反應(yīng)，使蛋白質(zhì)在熒光素電化學(xué)發(fā)光下顯色，并通過成像設(shè)備進(jìn)行記錄和保存。

WB（western blotting）蛋白質(zhì)檢測方法，簡單、快捷、靈敏度高，對于CXCR4蛋白的表達(dá)情況研究有著廣泛的應(yīng)用。此外，為了增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前需要進(jìn)行設(shè)計(jì)、樣品處理、抗體選擇和數(shù)據(jù)分析等方面的完善和細(xì)致計(jì)劃。